doma internet

Virus hepatitisa s kvalitativno RNA ni bil odkrit. Diagnoza hepatitisa C s PCR študijo

Hepatitis C je vnetje jetrnih celic, ki nastane kot posledica okužbe z virusom HCV (hepatitis C) ob stiku s krvjo okužene osebe. Genetsko kodo flavivirusa HCV nosi molekula RNA (ribonukleinska kislina), ki jo vsebuje struktura virusa. Ta življenjsko nevaren pojav razlikuje tajnost na začetni stopnji patologije. Časovni interval med okužbo in pojavom simptomov (odziv imunski sistem) se lahko giblje od enega meseca do šestih mesecev. Praviloma ima bolezen kronično obliko in jo je težko pozdraviti.

Sodobna medicina omogoča diagnosticiranje patologije z manjšimi poškodbami jeter. do najpogostejših in učinkovite metode Diagnoza vključuje analizo PCR. Razmislimo v tem članku, kaj je in kakšne so njegove sorte.

Kaj je raziskava

PCR analiza za hepatitis C je laboratorijski test, ki odkrije flavirus, genski material virusa ribonukleinske kisline (RNA). Določa število molekul RNA v krvi, kakovost biološkega materiala, genetski tip flavirusa HCV.

Metoda PCR za hepatitis C omogoča odkrivanje minimalne količine flavirusa še pred tvorbo protiteles, praviloma kmalu po okužbi.

Študija se pogosto imenuje analiza RNA, saj zazna delce ribonukleinske kisline, ki imajo velikost 30-60 nm, ki jih vsebuje flavavirus.

Študija se izvaja na naslednji način: na prazen želodec bolnik daruje kri iz vene, ki se nato testira z različnimi metodami:

PCR v realnem času se izvaja na zaprt, avtomatiziran način in ima spodnjo mejo detekcije za virus RNA 15 IU/mL;
COBAS AMPLICOR z občutljivostjo 50-100 ie/ml.

Višji kot je prag občutljivosti diagnostične tehnike, večja je verjetnost, da se odkrije zelo minimalna vsebnost virusa v biološkem materialu, ki se preučuje.

Katere vrste analiz se uporabljajo

Analiza, ki se uspešno uporablja že več desetletij, se imenuje PCR hepatitis, medtem ko se odkrije precej preprosto in hitro. V medicini obstajata dve metodi za izvedbo reakcije, ki se med seboj bistveno razlikujeta:

kvalitativna metoda razkriva prisotnost genetskega vira določenega virusa v biološkem materialu;
kvantitativna analiza meri količino genetske snovi, ki omogoča določitev stopnje patologije ali oceno učinkovitosti potekajočega terapevtskega tečaja;
genotipizacija določa vrsto virusa, ki je prisoten v telesu.

Na splošno krvni test pomaga ugotoviti naravo viremije in genetsko vrsto patogena. Študija se praviloma izvede 1-krat, odvisno od stopnje občutljivosti diagnostičnega sistema. Po potrebi ponovno testirajte z ultraobčutljivim reagentom.

Kvalitativni PCR

Kaj je kvalitativna PCR RNA za hepatitis C? Bistvo reakcije je v prisotnosti zaporedja RNA hepatitisa, reakcija pa je možna le v prisotnosti virusnih proteinov podobne etimologije v ELISA. V procesu primerjave se razkrijejo obremenitev in možna poškodba območja jeter.

Posebnost te metode je sposobnost zaznavanja celo prisotnosti enega samega gena.

Opozoriti je treba, da bolnik po prejemu rezultatov študije PCR in ELISA potrebuje ustrezno zdravljenje, ne glede na to, kakšen je končni rezultat encimskega imunskega testa. Pozitivno kaže na okužbo, PCR negativno pa na zmanjšano število virusnih delcev glede na stopnjo občutljivosti.

Obstaja več pogojev, ki vplivajo na prejem negativne PCR in ELISA:

pomanjkanje ustreznih pogojev za zbiranje gradiva;
nastala analiza vsebuje kontaminacijo;
v primeru zgodnjega dajanja injekcij heparina bolniku.

Pacientu ni treba upoštevati določenih pravil za odvzem krvi za analizo PCR, v tem primeru je kakovost te analize odvisna od zdravstvenega delavca, ki izvaja postopek. Sposobnost ugotavljanja prisotnosti bolezni (zlasti v akutni obliki) se pojavi v nekaj tednih po okužbi.

Kvantitativna analiza

Priporočljiv je kvantitativni test za odkrivanje virusne obremenitve tik pred oblikovanjem nadaljnje terapije in odzivom telesa. Postopek odvzema krvi poteka na enak način kot pri kakovostni PCR in ELISA, edini pogoj je, da bolnik pred posegom ne sme kaditi.

Kar zadeva značilnosti podatkov, pridobljenih kot rezultat študije, so za povečano obremenitev značilni kazalniki od 800.000 IU / ml, nizko - 400.000 IU / ml. Prisotnost virusa v bolnikovem telesu je indicirana s PCR za hepatitis, nenegativni kvalitativni test.

S to vrsto študije je mogoče ugotoviti, kako nevaren je bolnik za ljudi okoli njega. Tako na primer odkritje visoke ravni kaže na povečano nalezljivost bolnika. Poleg tega rezultati analize pomagajo določiti nadaljnje najučinkovitejše zdravljenje in ugotoviti, kako učinkovita je obstoječa terapija.

Hiter negativen odziv na testu kaže na uspešnost izbrane tehnike, počasen pa na potrebo po prilagoditvi in uporabi vsestranskega zdravljenja.

Postopek izvajanja postopka jemanja analize je odvisen od določenega dne poteka bolezni. Prvo določanje se opravi prvi dan po sprejemu bolnika v bolnišnico, nato se postopek ponovi 4, 12 in 24 tednov po začetku zdravljenja.

Tako kvantitativna analiza pokaže, katero zdravljenje je najučinkovitejše, trajanje razpoložljive terapije in tveganje bolnika v odnosu do drugih ljudi.

Genotipizacija

Pri pregledu analiznega materiala je pomembno določiti točnost genotipa virusa, ki poteka. Trenutno obstaja 11 vrst virusa hepatitisa C, ki pa vključujejo nekatere podvrste.

Vse te vrste se različno odzivajo na različna zdravljenja, medtem ko so nekatere sorte popolnoma odporne na številna zdravila.

Genotip omogoča določitev in prikaz stanja jeter. Ni nenavadno, da rezultati zabeležijo »nitipizirano«, kar pomeni, da ta testni sistem ne zazna virusa v pacientovi krvi. To je mogoče zaznati, če določen genotip ne ustreza določenemu območju. V takšni situaciji se ponovno izvede vzorčenje analize, za študij materiala pa se uporabi občutljivejši sistem.

Ultraobčutljiva metoda

Ultrasenzitivna metoda je potrebna v določenih primerih, ko diagnoze hepatitisa ni mogoče izvesti z drugimi metodami, medtem ko o tem, kdaj opraviti test, določi lečeči zdravnik:

če obstaja sum na prisotnost virusa hepatitisa C pri bolnikih z latentno vrsto bolezni;
prisotnost protiteles proti virusu hepatitisa C, ki ni potrjena s PCR diagnostiko;
da bi ugotovili kakovost učinkovitosti izbrane metode zdravljenja in potrdili dejstvo odprave bolezni.

Občutljivost te metode je veliko večja od tistih, ki se običajno uporabljajo, vendar ta metoda ne izključuje lažnih rezultatov, tako pozitivnih kot negativnih. V takšni situaciji je pomembno nadzorovati kakovost postopka in možnost kontaminacije samega materiala.

Dešifriranje PCR analize

Dekodiranje analize se izvede na podlagi predstavljenih materialov, rezultati laboratorijskih študij pa vključujejo nekatere zgoraj opisane podatke.

Dešifriranje lahko vključuje identifikacijo pozitivne PCR polimerazne verižne reakcije v testu in negativno vrednost ELISA pomeni, da bolnik v krvi nima znakov hepatitisa C, v preteklosti pa je imel akutno obliko te bolezni. Praviloma se strokovnjaki pri diagnosticiranju zatečejo k uporabi indikatorjev PCR testov.

Če povzamemo vse navedeno, lahko sklepamo, da je pri izvajanju analize pomembno upoštevati vsa pravila in priporočila, da so dobljeni rezultati čim bolj točni, na podlagi pridobljenih podatkov pa je mogoče določiti učinkovitost uporabljene terapije in nadaljnje možnosti za popolno okrevanje.

Vsi ne vedo, za kaj se ta metoda uporablja PCR diagnostika za hepatitis C. Ena izmed zelo razširjenih skupin bolezni so nalezljive bolezni prebavil. Najpogosteje trpijo želodec (razjede), črevesje (kolitis, enteritis) in jetra (hepatitis).

Med vsemi zgoraj navedenimi organi največjo obremenitev nosijo jetra. Vloga jeter v telesu je izjemno pomembna:

Skoraj vse presnovne reakcije potekajo v jetrih (tu se tvorijo vse vrste vitalnih komponent, ki telesu omogočajo polno delovanje).
Jetra so glavni organ za razstrupljanje. Z njegovo pomočjo (zlasti z žolčem) se odstranijo številni substrati, ki lahko povzročijo zastrupitev in povzročijo resne posledice.

Žal veliko ljudi ne skrbi za svoje zdravje, zato začnejo trpeti jetra. Običajno se razvije hepatitis različne etiologije (virusni, toksični).

Opredelitev hepatitisa

zavzemajo pomembno mesto med boleznimi jeter. Resnost poteka bolezni, zapletenost zdravljenja jih postavljajo na prvo mesto med patologijo drugačne narave tega organa.

Vsi hepatitisi so razdeljeni na akutne in kronične. Hepatitisa A in B uvrščamo med akutne, med kroničnimi pa je na prvem mestu hepatitis C.

To bolezen povzroča virus hepatitisa C. značilna lastnost je to bolezen dolgo časa se lahko pojavi brez kakršnih koli kliničnih manifestacij.

Prenaša se predvsem s krvjo. S krvnim obtokom se virus prenese v jetra, kjer se v celicah začne razmnoževati. Zaradi kopičenja virionov se okuženi hepatocit uniči. V odgovor na to se začnejo proizvajati protitelesa, ki začnejo napadati ostanke hepatocitov. Zaradi tega se sčasoma nabira bazen proti jetrnim celicam, kar poslabša potek bolezni.

Ker je bolezen oligosimptomatska ali asimptomatska, klinični znaki pa se pojavijo le ob večjih poškodbah celic, je za to bolezen potrebno razviti diagnostične metode za odkrivanje njene prisotnosti in sprejetje ustreznih ukrepov.

Diagnoza hepatitisa C: kvalitativni in kvantitativni testi

Trenutno se uporabljajo metode, kot so biopsija jeter, imunogram.

Omogočajo vam neposredno določitev prisotnosti prizadetih hepatocitov (pregled biopsije jeter) ali specifičnih protiteles proti prizadetim celicam (imunogram). Vendar pa obstaja metoda, ki vam omogoča zanesljivo določitev prisotnosti samega virusa. To je PCR - polimerazna verižna reakcija.

Bistvo te metode je v tem, da se pod določenimi pogoji proizvajajo verige RNA. To je posledica dejstva, da so v krvi ali biopsiji, ki se preučuje, delci virusnega delca. Ko se združijo z nekaterimi molekulami v okolju, pride do sinteze verig, komplementarnih virusni RNA. Ko jih nato analiziramo in primerjamo z znanim zaporedjem nukleotidov virusa hepatitisa C, je mogoče ugotoviti, ali je ta virus prisoten v telesu in ali je prisotna poškodba jeter.

PCR se izvaja po odkrivanju specifičnih protiteles proti virusu hepatitisa v krvi. Po testu se izda rezultat - RNA "zaznana" ali "ni zaznana". Občasno lahko piše "ni dovolj materiala" - v tem primeru je potrebna druga analiza za hepatitis C.

Če je število virusnih delcev manjše od zahtevanega minimalnega števila, potem lahko rečemo, da hepatitisa ni, minimalne količine genskega materiala pa bi se lahko »zmedele« zaradi posnemanja genetskega materiala ali nekaterih nukleotidnih zaporedij, ki bi lahko po naključju sovpadajo z virusom.

S PCR negativni rezultat je mogoče opaziti, ko so v krvi res virusni delci, vendar jih je tako malo (okužba je nastala pred kratkim ali je bila analiza pred dolgotrajno in intenzivno protivirusno terapijo), da testni sistem preprosto ni mogel normalno določiti njihove koncentracije. RNA - "ni najdeno."
Če ima PCR pozitiven rezultat, potem je v krvi toliko virusnih delcev, da njihovo število presega spodnji prag občutljivosti testnega sistema. V tem primeru je tveganje za razvoj infekcijskega procesa veliko (ali pa je že prisotno v precej napredni fazi). Običajno je velika količina virusa že indikacija za zdravljenje in kasnejšo presaditev jeter.

Včasih lahko test postane lažno pozitiven ali lažno negativen.

Lažno negativen rezultat PCR hepatitisa opazili, ko so v reakcijskem mediju prisotne določene komponente, ki zavirajo tvorbo kopij virusnega delca. Zaradi tega ni mogoče dobiti prave slike o stanju krvi, kar prispeva k prehodu virusa in napredovanju bolezni. Na reakcijo lahko vpliva tudi prisotnost heparina v krvi (zaradi zmanjšanja relativne viskoznosti krvi). Napačna interpretacija analize je možna tudi, če niso bili izpolnjeni pogoji za prevoz in shranjevanje testnega materiala.

Lažno pozitivne rezultate, ko je diagnosticiran hepatitis C, PCR najpogosteje daje, ko je epruveta ali delovno okolje kontaminirano. Poleg tega lahko pozitivne rezultate opazimo v prisotnosti virusov hepatitisa drugih skupin (zaradi navzkrižne reakcije).

Kvalitativna analiza PCR za odkrivanje hepatitisa C

Prisotnost v krvi veliko število krioglobulini tudi neposredno vplivajo na izvajanje PCR. Zaradi tega je pred izvedbo C nujno določiti njihovo koncentracijo v krvi, da bi vnaprej prepoznali izkrivljanje rezultata in ga preprečili.

Po izvedbi teh testov postane jasno, ali so v krvi virusni delci. Pri njihovem določanju je priporočljivo takoj začeti protivirusno terapijo, da bi upočasnili napredovanje procesa. Za razliko od hepatitisa B za hepatitis C ni popolnega zdravljenja; bolezen le preide v latentno fazo in začne napredovati počasneje. Poškodbe jeter so neizogibne. Na zadnji stopnji procesa, ko jetra ne morejo več obvladovati svoje funkcije, jih bo morda treba presaditi.

Zdravljenje se izvaja predvsem z dvema zdraviloma - interferonom in ribavirinom.

Njihova učinkovitost pri upočasnitvi procesa poškodbe hepatocitov je dokazana. Na poti je nujno predpisana infuzijska terapija, da se olajša delo jeter.

Vsi bolniki, pri katerih se je povečalo število virusnih delcev v krvi, morajo biti prijavljeni pri hepatologu. Večkrat na leto se priporoča preventivni pregled, da se ugotovi napredovanje procesa in pravočasno ugotovi indikacije za presaditev. Poleg tega se lahko uporabljajo tudi hepatoprotektorji, čeprav se mnenja zdravnikov nekoliko razlikujejo. Nekateri verjamejo, da vam ta zdravila omogočajo ustavitev procesa in zaščito hepatocitov, ki še niso bili prizadeti; drugi so prepričani, da jih nima smisla jemati in je treba izvajati intenzivno protivirusno terapijo.

Tako hepatitis C spada v kategorijo bolezni, katerih prepoznavanje je nekoliko težko. Izboljšanje diagnostičnih metod in pravočasni preventivni pregledi bodo zmanjšali pojavnost te bolezni. Pomembno je tudi preprečevanje te bolezni. Previdno se je treba izogibati stiku s krvjo, ne jemati zdravil, šele tako bo ta bolezen izkoreninjena. Glavna stvar pri preprečevanju in zdravljenju je zavesten odnos bolnika do svojega zdravja.

Pri hepatitisu C je RNA testiranje najpomembnejša in natančna metoda za določanje trajanja poteka bolezni. Ta študija vam omogoča, da določite potrebno metodo zdravljenja. Za diagnosticiranje bolezni se običajno uporablja več krvnih preiskav:

markerji hepatitisa C - uporabljajo se ob prvem sumu na prisotnost bolezni;
Študija RNA virusa hepatitisa C.

Virusni hepatitis

Virusni hepatitis C je nalezljiva bolezen, ki prizadene jetra. Glavna pot okužbe je zaužitje okužene krvi. To se lahko zgodi med transfuzijo krvi zaradi nesterilnih medicinskih instrumentov. Včasih se bolezen prenaša z nezaščitenim spolnim odnosom ali med porodom z okužene matere na otroka.

Bolezen je nevarna za kronično obliko. Lahko traja vse življenje in povzroči hudo disfunkcijo jeter, cirozo ali raka. Približno 80 % okuženih ima kronično obliko bolezni.

Glavna nevarnost bolezni je v latentni obliki bolezni, brez očitnih simptomov. Včasih se temperatura dvigne, pojavita slabost in bruhanje, telesna oslabelost, utrujenost, izguba apetita in teže. Za jetrno tkivo pri tej bolezni je značilno rahlo zbijanje, zaradi česar se njegove celice maligno degenerirajo. Razvoj bolezni je zelo počasen in lahko traja več desetletij.

Opredelitev RNA

Kaj je RNA hepatitisa C in zakaj bi jo bilo treba testirati? Vsak virus je najmanjši delček RNA. Določanje RNA virusa je v bistvu biološka študija krvnih celic, da se ugotovi prisotnost v telesu genskega materiala virusa hepatitisa C. Za to se uporablja metoda verižne reakcije s polimerazo. Obstajata 2 vrsti testov za določanje RNA virusa hepatitisa C.

S kvalitativnim testom ugotavljamo prisotnost virusa v celicah cirkulacijski sistem. Pozitiven test kaže, da se virus aktivno razmnožuje v krvi in okuži zdrave jetrne celice. Protivirusna terapija vključuje opravljanje tega testa v obdobju 4, 12 in 24 tednov zdravljenja. Po prekinitvi zdravljenja se analiza opravi tudi po 24 tednih, nato pa 1-krat na leto.

Za določitev koncentracije (specifične vsebnosti) virusa hepatitisa C v krvi se opravi kvantitativni test. To pomeni, da se določi količina virusne RNA v določeni količini krvi. Resnost bolezni ni odvisna od količine virusa. Ta analiza se izvaja za določitev stopnje nalezljivosti bolezni. Določa uspešnost zdravljenja in trajanje protivirusne terapije ter se izvaja pred njenim začetkom in 3 mesece po koncu.

Do danes jih je znanih 10. Genotipizacija virusne RNA omogoča diagnosticiranje prisotnosti različni tipi bolezni. Genetski tip virusa je odločilen pri določanju časa zdravljenja. Pravilno izbrano zdravljenje lahko zagotovi 90-odstotno jamstvo za popolno okrevanje.

Virus hepatitisa C (HCV) je RNA virus iz družine Flaviviridae. Ta okužba se lahko razmnožuje v krvnih celicah (monociti, nevtrofilci, B-limfociti in makrofagi), pa tudi okuži celice samih jeter - hepatocite. Zahvale gredo visoka stopnja mutacijske aktivnosti, se ta vrsta hepatitisa lahko izogne učinkom človeškega imunskega sistema.

Obstaja 11 genotipov in veliko podtipov takega virusa, ki se razlikujejo po stopnji okvare jeter in vplivajo na čas zdravljenja hepatitisa. Ta raznolikost hepatitisa C zahteva različne metode protivirusnega zdravljenja. Na primer, genotipa hepatitisa 1 in 4 je treba zdraviti 48 tednov, za potek terapije proti virusom 2. in 3. tipa pa lahko traja le 24 tednov.

Potem ko je hitri test za hepatitis C dal pozitiven rezultat, se izvede analiza PCR za odkrivanje RNA tega virusa v vzorcih krvi.

PCR diagnostika

Verižna reakcija s polimerazo (PCR) je eksperimentalna tehnika za odkrivanje virusov. Takšna analiza za hepatitis C vam omogoča znatno povečanje koncentracije določenih fragmentov DNK ali RNA virusa v predloženih vzorcih. Tako jih je mogoče prepoznati in celo prešteti število.

Ta test za hepatitis C se izvaja po naslednji metodi:

V epruveto vnesemo vzorec krvi (genetski material), ki lahko vsebuje želeni gen za hepatitis. Nanjo so nameščene posebne snovi - primeri, so kratki odseki iz želenega gena, ki se sintetizirajo kemično. V to posodo je dodana tudi DNK ali RNA polimeraza, sposobna je zgraditi verige nukleinskih kislin, ki so popolnoma enake originalu. Nastali sestavi je dodan izbor prostih nukleotidov, ki so posebna gradbeni material za DNK in RNA, eden od njih pa vsebuje najmanjše delce radioaktivnega fosforja.
Nastalo zmes najprej segrejemo na 95 stopinj, zaradi česar se zaradi takšnega udarca odvijeta obe verigi DNK, ki sta v normalnem stanju prepletena.
Za nadaljevanje analize se pripravek ohladi, v tem trenutku so primerji pritrjeni na želeni del genoma virusa hepatitisa, kar preprečuje, da bi se DNK oblikovala v dvojno vijačnico. Ko se zmes ohladi, polimeraza išče točno posamezne verige nukleotidov. Med pritrditvijo tega encima drsi vzdolž verige DNK (kot blok na vrvi), na dvojni vijačnici pa ne more "delovati", zato se zmes segreje.
Za razširitev analize se izvede ponovno segrevanje, kar spet vodi do ločitve nukleotidnih verig. Ko se takšni cikli PCR izvajajo v vzorcu, se število želenih genov hepatitisa poveča v geometrijskih razmerjih, ostali genetski materiali pa se proizvajajo (tvorijo) le v linearnem vzorcu.
Za dokončanje študije raztopino očistimo iz preostalih delcev nukleotidov. Ločimo jih z elektroforezo, pri čemer ločimo glede na parametre molekulske mase verig DNK. Takšni testi za hepatitis C z uporabo PCR omogočajo ugotavljanje, ali so v testnem vzorcu prisotni želeni virusni geni ali ne.

Prednost tega testa je zelo visok prag občutljivosti PCR reakcije. V idealnem primeru takšna diagnostična tehnika zahteva samo en virusni genom za celoten vzorec.

Poleg tega je tak PCR popolnoma specifičen. Vsak od genov ima edinstveno zaporedje nukleotidov, ki se, kot prstni odtis, ne morejo nikjer ponoviti. Za ta test hepatitisa C so začetnice sintetizirane tako, da se popolnoma ujemajo z edinstvenimi regijami zanimivih genov, ki jih nima nobeno drugo zaporedje.

Ta tehnika vam omogoča tudi analizo hepatitisa B C in njihovo določitev, kar pomaga pri vzpostavitvi končne diagnoze.

Ta laboratorijska analiza zagotavlja več informacij kot le prisotnost ali odsotnost HCV RNA ali druge vrste RNA v vzorcih krvi. Z določitvijo parametra radioaktivnega sevanja je mogoče ugotoviti tudi, koliko želenega genskega materiala je bilo prvotno v preučevanem vzorcu. To vam omogoča, da določite parameter tako imenovane virusne obremenitve - koncentracije delcev hepatitisa RNA v določenem volumnu.

Kvalitativna analiza PCR

Ta analiza vam omogoča, da ugotovite prisotnost virusa hepatitisa v vzorcih krvi. Izvajati ga je treba za vse ljudi, pri katerih so odkrili protitelesa proti hepatitisu.

Kot rezultat takšne študije sta lahko le dve vrednosti:

"Odkriti". Tak pozitiven rezultat testa razlagamo na naslednji način: v analiziranem vzorcu iz biološkega materiala so bili najdeni fragmenti RNA virusa hepatitisa. Iz tega sledi, da je obstajalo dejstvo o okužbi bolnika s tem virusom. To lahko pomeni, da se povzročitelj hepatitisa razmnožuje v telesu in okuži nove celice ter uniči jetra.
"Ni zaznan". Ta rezultat kaže, da v vzorcu, ki smo ga analizirali v tem laboratoriju, niso našli fragmentov RNA, ki bi bili specifični za virus hepatitisa C. Možno je tudi, da je bila koncentracija RNA povzročitelja virusa v testnem vzorcu tako nizka, da test ni mogel zaznaj. V takih primerih naj bi bila raven koncentracije pod pragom občutljivosti testa.

Takšen test je lahko tudi lažno pozitiven ali lažno negativen, zaradi kontaminacije biomateriala ali prisotnosti v vzorcih specifičnih snovi, ki reagirajo s kemičnimi sestavinami, potrebnimi za analizo.

Poudariti je treba, da lahko v akutnih fazah hepatitisa C s kvalitativno študijo z metodo PCR odkrijemo njegovo RNA že po 1-2 tednih od trenutka okužbe telesa. To pomeni, da je bolezen mogoče odkriti že dolgo pred pojavom njenih zunanjih simptomov ali pojavom protiteles proti hepatitisu v telesu.

Vzorčenje krvi (iz vene) je najbolje opraviti na prazen želodec.

Kvantitativna PCR analiza

S pomočjo te analize se določi raven koncentracije virusa hepatitisa pri bolniku (virusna obremenitev). Takšen test je treba opraviti, da bi ocenili količino virusne RNA v enoti določene prostornine.

Dešifriranje testov za hepatitis C, opravljenih po tej metodi, ima lahko naslednje rezultate:

Kvantitativna analiza PCR, opravljena v različnih obdobjih protivirusne terapije (1., 4., 12. in 24. teden), omogoča presojo učinkovitosti zdravljenja in potrebne prilagoditve.

Posebnosti analize

Ta test je treba opraviti za določitev različnih genotipov hepatitisa C. Trenutno je znanih 11 genotipov tega patogena in veliko podtipov. Pri nas so pogosti genotipi hepatitisa C 1., 2. in 3. tipa. V laboratorijih je mogoče odkriti različne podtipe teh vrst: 1a, 1c, 2a, 2c ali 3, 4, 5, 6 genotipov z različnimi modifikacijami podtipov. Za vse te hepatitise je specifičnost določitve 100%.

Pojasnitev spremembe genotipa omogoča izbiro ustreznega zdravljenja. Prisotnost določenih vrst genotipa pri bolniku ne pomeni, da je bolezen lažja ali težja, gre le za sorte virusa hepatitisa in nič več.

V primerih, ko laboratorij ne more izolirati genotipa virusa, se lahko izda rezultat: »Ni vtipkano. Raziskali smo genotipe: take in drugačne« (npr. 1a, 2c, 3av). Ta prepis kaže, da v tem laboratoriju ni bilo ustreznih reagentov, ki bi lahko določili genotip virusa hepatitisa. Med študijo je bilo opravljeno preverjanje virusov, navedenih na seznamu, vendar njihova korespondenca z vzorci RNA ni bila ugotovljena.

Za dokončno diagnozo samo ena vrsta analize ni dovolj. Vsak od testov lahko da lažno pozitiven rezultat. Za natančno določitev vrste hepatitisa in stopnje poškodbe telesa s to okužbo se izvede obsežna študija. V tem primeru se opravi biopsija jeter in testirajo se njeni encimi: ALT, AST, pa tudi alkalna fosfataza in LDH. Lahko se opravi tudi bilirubinski test in analiza protrombinskega indeksa.

Le niz takšnih testov in laboratorijskih študij s splošno analizo bolnikovega stanja bo pomagal določiti prisotnost hepatitisa v telesu, njegovo obliko in resnost. Na podlagi njih lahko zdravnik določi nadaljnje zdravljenje in naredi možno prognozo za bolnika.

To je virus, ki vsebuje molekulo RNA. Zaradi svoje visoke sposobnosti mutiranja se lahko izogne imunskemu odzivu telesa. Obstaja šest glavnih genotipov virusa in veliko podtipov. V naši regiji so razširjeni predvsem genotipi 1, 2 in 3.

V 75–80 % bolezen postane kronična, kar povzroči stanje, v katerem se jetrno tkivo nadomesti z vezivnim tkivom. Fibroza pa vodi v raka ali cirozo. Glavna pot prenosa bolezni je skozi kri. Če je oseba upravičena do testa za hepatitis C, bo imela dva glavna testa. Določena so protitelesa proti virusu, v odsotnosti pa se šteje, da nima hepatitisa. Če se v krvi odkrije prisotnost protiteles proti virusu hepatitisa, se opravi analiza PCR.

RNA se s to metodo določi v krvi že 10-12 dni po okužbi in kaže, da se virus v telesu aktivno razmnožuje. V tem obdobju je virusa preprosto nemogoče odkriti drugače, saj še ne proizvaja specifičnih protiteles, poškodbe jeter pa so še vedno nevidne v biokemičnih preiskavah in biopsijah.

Različne študije PCR

PCR analiza ima določene prednosti:

V takšni študiji se izvede definicija virusa samega in ne produktov njegove vitalne aktivnosti. V tem primeru je mogoče določiti vrsto patogena.
Tehnika ima visoko specifičnost zaradi dejstva, da se pregleda le določen del DNK, zmanjša se verjetnost za pridobitev napačnih rezultatov.
Ima zelo visoko občutljivost, določi se celo minimalna količina virusa v krvi.

Obstajata dve glavni metodi za testiranje krvi za hepatitis C s PCR: kvalitativna in kvantitativna analiza PCR. Za ugotavljanje prisotnosti virusa se uporablja kvalitativna metoda. Takšno analizo opravijo vsi, ki imajo v krvi protitelesa proti hepatitisu. Rezultat je lahko samo dveh vrst: "najdeno" in "ni najdeno", zadnja vrednostšteje za normo.

Pozitiven rezultat testa pomeni, da so bili v vzorcu najdeni fragmenti RNA virusa, kar pa kaže, da je bila oseba okužena s hepatitisom. V primeru negativnega rezultata sta možni dve možnosti: okužbe ni bilo ali pa je njena koncentracija tako nizka, da je s to metodo ne zaznamo.

Kvantitativna metoda se razlikuje po bistvu študije, po njenih ciljih in indikacijah. Vsi bolniki s hepatitisom ne opravijo takšne analize. Tako kot vsak drug ima določene cilje. Določanje virusne obremenitve ali kvantitativna analiza PCR na RNA virusa se uporablja:

določiti RNA virusa v krvi in postaviti diagnozo "virusni hepatitis";
za napovedovanje kroničnosti hepatitisa in poteka bolezni;
spremljati protivirusno zdravljenje in sprejemati odločitve o njegovem podaljšanju, zmanjšanju ali spremembi taktike zdravljenja.

Študija se izvaja ob prisotnosti takšnih indikacij:

hepatitis C je bil odkrit med kvalitativno študijo in protitelesa v krvi;
z mešanim hepatitisom;
če je načrtovana protivirusna terapija;
med in po zdravljenju hepatitisa C;
v prisotnosti kroničnega in akutnega hepatitisa C.

Test se izvede za oceno števila virusnih enot v danem volumnu vzorca krvi 1 cm³ ali 1 ml. Rezultati so navedeni v številkah. Uporabljeni indikatorji so: IU / ml, kar pomeni mednarodna enota na mililiter in kopije na ml, število kopij RNA v 1 ml vzorca. Višji kot je kvantitativni kazalnik analize, večja je verjetnost prenosa virusa na drugo osebo.

R-DNA - metoda razvejene DNK. Lažja in cenejša metoda. Uporablja se za večje število vzorcev, ima nizko občutljivost, od 500 ie / ml. Pri tej občutljivosti obstaja možnost, da virus ne bo odkrit, tudi če je prisoten v krvi.

TMA - metoda transkripcijske amplifikacije. Ta tehnika zazna nukleinske kisline v krvi. Ima nizko ceno in hkrati visoko občutljivost, od 5-10 ie / ml. Relativno nova tehnika, ki vam omogoča, da pospešite in zmanjšate stroške postopka testiranja.

Rezultati kvantitativne analize določanja virusne RNA, ki jih je predstavil laboratorij, so dešifrirani na naslednji način:

Številčna vrednost količine virusa, ie / ml	Dešifriranje rezultatov
Ni zaznan	Norma za zdravi ljudje. Vrednost virusa je pod mejo občutljivosti metode ali pa je v celoti odsotna.
Do 1,8*10^2	Koncentracija je pod linearnim območjem.
Do 8*10^5	Virus so našli v krvi. Virusna obremenitev je nizka.
Več kot 8*10^5
Več kot 2,4*10^7	Odkrit virus. Viremija je visoka, nad linearnim razponom.

Rezultate kvantitativne analize je mogoče predložiti tako v enotah ie / ml kot v kopijah na ml. Hkrati se pretvorbeni faktor običajno razlikuje za različne laboratorije in metode. Njegove vrednosti se gibljejo od ena do pet, splošno velja, da je v povprečju 1 ie 4 kopije na ml.

Uporabnost testiranja viremije v različnih fazah

Analiza se uporablja za odkrivanje aktivne okužbe v telesu. Po njegovem rezultatu je mogoče oceniti, kakšna je verjetnost prenosa virusa. To je pomembno, na primer med nosečnostjo, kdaj govorimo o možnosti okužbe otroka od matere s hepatitisom.

Analiza se izvede šele po odkrivanju prisotnosti protiteles proti virusu v krvi. To je potrebno, ker do 25 % ljudi, ki so imeli akutno obliko hepatitisa, ozdravi sami, virusa pa v laboratorijskih preiskavah nimajo. Rezultati se uporabljajo za oceno učinkovitosti zdravljenja in pred njim.

Diagnostika PCR se izvede pred zdravljenjem, da se naknadno ugotovi njegova učinkovitost. Verjetnost ugodnega izida zdravljenja je obratno sorazmerna s tem parametrom. Višja kot je, slabša je napoved.

Med zdravljenjem se analiza izvaja pri 1, 4, 12, 24 tednih. Zdravljenje povzroči popoln virološki odziv, pod pogojem, da virusna obremenitev ni določena s takšno analizo.

Če se 12 tednov po začetku zdravljenja indikator ne zmanjša za dve logaritemski enoti, potem najverjetneje ta terapija v tem primeru ne bo pomagala.

V analizah je padec virusne obremenitve na logaritemsko enoto izražen kot zmanjšanje števila ničel v rezultatu za eno. Na primer, z 1.000.000 ie bi se morala zmanjšati na 100.000 ie.

Po zdravljenju je določeno za odkrivanje recidivov. Torej odstopanje tega parametra od norme kaže, da se količina virusa v telesu povečuje in se tako bolezen vrača.

Nekateri kazalniki lahko vplivajo na rezultat. Najprej je to možna napaka laboratorija, kršitve pravil za izvajanje raziskav, standardov za shranjevanje in pripravo vzorcev, pa tudi:

kontaminacija vzorca biomateriala;
prisotnost preostalih sledi heparina v krvi;
prisotnost v krvi inhibitorjev - snovi, ki so kemične spojine ali beljakovine, ki vplivajo na sestavine PCR.

Rezultati študije se lahko razlikujejo tudi za različne laboratorije, kar je posledica uporabe različnih reagentov in drugih razlogov. Ta pojav je popolnoma normalen. Zato je za pravilno oceno učinkovitosti zdravljenja vredno analizirati v istem laboratoriju.

Pomembne opombe o raziskovalni metodologiji:

Stopnje virusne obremenitve ni mogoče uporabiti za presojo stopnje poškodbe jeter ali resnosti samega poteka hepatitisa. Za oceno teh kazalnikov je potrebno izvesti dodatne študije, kot so biokemični krvni test, biopsija, elastometrija in drugi.
Pri načrtovanju in protivirusni terapiji je poleg indikatorja viremije pomembno določiti genotip virusa.