Virusul hepatitei cu ARN calitativ nu a fost detectat. Diagnosticul hepatitei C prin studiu PCR

Hepatita C este o inflamație a celulelor hepatice care apare ca urmare a infecției cu virusul VHC (hepatita C) prin contactul cu sângele unei persoane infectate. Codul genetic al flavivirusului VHC este purtat de molecula de ARN (acid ribonucleic) conținută în structura virusului. Acest fenomen care pune viața în pericol distinge secretul în stadiul inițial al patologiei. Intervalul de timp dintre infecție și apariția simptomelor (răspuns sistem imunitar) poate varia de la o lună la șase luni. De regulă, boala ia o formă cronică și este dificil de vindecat.

Medicina modernă face posibilă diagnosticarea patologiei cu leziuni hepatice minore. la cele mai comune şi metode eficiente diagnosticul include analiza PCR. Să luăm în considerare în acest articol ce este și ce soiuri există.

Ce este cercetarea

Analiza PCR pentru hepatita C este un test de laborator care detectează flavirusul, materialul genetic al virusului acidului ribonucleic (ARN). Determină numărul de molecule de ARN din sânge, calitatea materialului biologic, tipul genetic al flavirusului HCV.

Metoda PCR pentru hepatita C permite detectarea cantității minime de flavirus chiar înainte de formarea de anticorpi, de regulă, la scurt timp după infecție.

Studiul este adesea denumit analiză ARN, deoarece detectează particule de acid ribonucleic având o dimensiune de 30-60 nm conținute în flavavirus.

Studiul se desfășoară după cum urmează: pe stomacul gol, pacientul donează sânge dintr-o venă, care este apoi testat prin diferite metode:

• PCR în timp real este efectuată într-o manieră închisă, automatizată și are o limită inferioară de detecție pentru virusul ARN de 15 UI/mL;
• COBAS AMPLICOR cu o sensibilitate de 50-100 UI/ml.

Cu cât pragul de sensibilitate al tehnicii de diagnosticare este mai mare, cu atât este mai probabil să detecteze conținutul minim de virus în materialul biologic studiat.

Ce tipuri de analize sunt folosite

O analiză care a fost folosită cu succes de câteva decenii se numește hepatită PCR, în timp ce este depistată destul de simplu și rapid. În medicină, există două metode de desfășurare a reacției, care sunt fundamental diferite una de cealaltă:

• o metodă calitativă dezvăluie prezența în materialul biologic a sursei genetice a unui anumit virus;
• analiza cantitativă măsoară cantitatea de materie genetică, permițând determinarea stadiului patologiei sau evaluarea eficacității cursului terapeutic în curs;
• genotiparea determină tipul de virus prezent în organism.

În general, un test de sânge ajută la identificarea naturii viremiei și a tipului genetic al agentului patogen. De regulă, studiul se efectuează 1 dată, în funcție de gradul de sensibilitate al sistemului de diagnosticare. Dacă este necesar, retestați folosind un reactiv ultrasensibil.

PCR calitativ

Ce este un ARN PCR calitativ pentru hepatita C? Esența reacției constă în prezența secvenței ARN hepatitei, iar reacția este posibilă numai în prezența proteinelor virale cu o etimologie similară în ELISA. În procesul de comparație, sunt dezvăluite încărcătura și posibilele leziuni ale zonei ficatului.

O caracteristică distinctivă a acestei metode este capacitatea de a detecta chiar și prezența unei singure gene.

Trebuie menționat că, după primirea rezultatelor studiului PCR și ELISA, pacientul are nevoie de un tratament adecvat, indiferent de rezultatul final al imunotestului enzimatic. Pozitiv indică infecție, iar PCR negativ indică un număr redus de particule virale în raport cu nivelul de sensibilitate.

Există mai multe condiții care afectează primirea unei PCR și ELISA negative:

• lipsa condițiilor adecvate pentru colectarea materialului;
• analiza rezultată conține contaminare;
• în cazul administrării precoce a injecţiilor cu heparină la pacient.

Pacientul nu este obligat să respecte anumite reguli pentru prelevarea de sânge pentru analiza PCR, în acest caz, calitatea acestei analize depinde de lucrătorul medical care efectuează procedura. Capacitatea de a stabili prezența bolii (în special în forma acută) apare în câteva săptămâni după infectare.

Analiza cantitativa

Se recomandă un test cantitativ pentru a detecta încărcătura virală imediat înainte de formarea terapiei ulterioare și de răspunsul organismului. Procesul de prelevare de sânge se desfășoară în același mod în care cu PCR și ELISA de înaltă calitate, singura condiție este ca pacientul să nu poată fuma înainte de procedură.

În ceea ce privește caracteristicile datelor obținute în urma studiului, sarcina crescută este caracterizată de indicatori de la 800.000 UI / ml, scăzut - 400.000 UI / ml. Prezența virusului în corpul pacientului este indicată prin PCR pentru hepatită, un test calitativ nenegativ.

Acest tip de studiu face posibilă determinarea cât de periculos este pacientul pentru oamenii din jurul lui. Deci, de exemplu, detectarea unui nivel ridicat indică o infecțiozitate crescută a pacientului. În plus, rezultatele analizei ajută la determinarea celui mai eficient tratament și la determinarea cât de eficientă este terapia existentă.

Un răspuns negativ rapid la test indică succesul tehnicii alese, iar unul lent indică necesitatea ajustării și utilizarea unui tratament versatil.

Procesul de efectuare a procedurii de efectuare a analizei depinde de ziua specifică a evoluției bolii. Prima determinare se efectuează în prima zi după internarea pacientului în spital, apoi procedura se repetă la 4, 12 și 24 de săptămâni după începerea tratamentului.

Astfel, analiza cantitativă arată care tratament este cel mai eficient, durata terapiei disponibile și riscul pacientului în raport cu alte persoane.

Genotiparea

Când se examinează materialul de analiză, este important să se determine acuratețea genotipului virusului care are loc. În prezent, există 11 soiuri ale virusului hepatitei C, care la rândul lor includ anumite subspecii.

Toate aceste specii răspund diferit la diferite tratamente, în timp ce unele soiuri sunt complet rezistente la multe medicamente.

Genotipul face posibilă determinarea și afișarea stării ficatului. Nu este neobișnuit ca rezultatele să înregistreze „netipizat”, ceea ce înseamnă că virusul din sângele pacientului nu este detectat de acest sistem de testare. Acest lucru poate fi detectat dacă un anumit genotip nu corespunde unei anumite zone. Într-o astfel de situație, eșantionarea analizei este efectuată din nou, în timp ce se folosește un sistem mai sensibil pentru studierea materialului.

Metoda ultrasensibilă

O metodă ultrasensibilă este necesară în anumite cazuri când diagnosticul de hepatită nu poate fi efectuat prin alte metode, în timp ce momentul în care să faceți testul este determinat de medicul curant:

• dacă se suspectează prezența virusului hepatitei C la pacienții cu un tip latent al bolii;
• prezența anticorpilor împotriva virusului hepatitei C, neconfirmată prin diagnosticul PCR;
• pentru a determina calitatea eficacității metodei de tratament alese și pentru a confirma faptul de a elimina boala.

Sensibilitatea acestei metode este mult mai mare decât cele utilizate de obicei, cu toate acestea, această metodă nu exclude rezultatele false, atât pozitive, cât și negative. Într-o astfel de situație, este important să se controleze calitatea procedurii și posibilitatea de contaminare a materialului în sine.

Descifrarea analizei PCR

Decodificarea analizei se realizează pe baza materialelor prezentate, în timp ce rezultatele studiilor de laborator includ anumite date descrise mai sus.

Descifrarea poate include identificarea unei reacții în lanț a polimerazei PCR pozitive în test și valoare negativă ELISA înseamnă că pacientul nu are semne de hepatită C în sânge, dar în trecut a avut o formă acută a acestei boli. De regulă, la diagnosticare, specialiștii recurg la utilizarea indicatorilor testelor PCR.

Rezumând toate cele de mai sus, putem concluziona că atunci când se efectuează o analiză, este important să se respecte toate regulile și recomandările pentru ca rezultatele obținute să fie cât mai exacte, iar pe baza datelor obținute, se poate determina eficacitatea terapiei utilizate și șansa suplimentară pentru o recuperare completă.

Nu toată lumea știe pentru ce este folosită metoda Diagnosticare PCR pentru hepatita C. Una dintre grupele larg răspândite de boli sunt bolile infecțioase ale tractului gastrointestinal. Cel mai adesea suferă stomacul (ulcere), intestinele (colită, enterită) și ficatul (hepatită).

Dintre toate organele de mai sus, ficatul poartă cea mai mare povară. Rolul ficatului în organism este extrem de important:

1. Aproape toate reacțiile metabolice au loc în ficat (aici se formează toate tipurile de componente vitale care permit organismului să funcționeze pe deplin).
2. Ficatul este principalul organ detoxifiant. Cu ajutorul acestuia (în special prin bilă), sunt îndepărtate multe substraturi care pot provoca intoxicație și pot duce la consecințe grave.

Din păcate, mulți oameni nu au grijă de sănătatea lor, motiv pentru care ficatul începe să sufere. De obicei se dezvoltă hepatită de diverse etiologii (virale, toxice).

Definiţia hepatitis

ocupă un loc important în rândul bolilor hepatice. Severitatea evoluției bolii, complexitatea tratamentului le-au pus pe primul loc printre patologia de natură diferită a acestui organ.

Toate hepatitele sunt împărțite în acute și cronice. Hepatitele A și B sunt clasificate ca acute, iar hepatitele C se află pe primul loc între cele cronice.

Această boală este cauzată de virusul hepatitei C. trăsătură caracteristică este că boala perioadă lungă de timp poate apărea fără manifestări clinice.

Se transmite în principal prin sânge. Odată cu fluxul sanguin, virusul este transportat la ficat, unde începe să se înmulțească în celulele sale. Ca urmare a acumulării de virioni, hepatocitul infectat este distrus. Ca răspuns la aceasta, încep să se producă anticorpi, care încep să atace rămășițele de hepatocite. Din această cauză, în timp, se acumulează un bazin împotriva celulelor hepatice, ceea ce agravează evoluția bolii.

Datorită faptului că boala este oligosimptomatică sau asimptomatică, iar semnele clinice apar doar cu leziuni celulare semnificative, această boală necesită dezvoltarea unor metode de diagnostic pentru a detecta prezența ei și a lua măsurile adecvate.

Diagnosticul hepatitei C: teste calitative și cantitative

În prezent, sunt folosite metode precum biopsia hepatică, imunograma.

Acestea vă permit să determinați în mod direct prezența hepatocitelor afectate (examinarea unei biopsii hepatice) sau a anticorpilor specifici împotriva celulelor afectate (imunogramă). Cu toate acestea, există o metodă care vă permite să determinați în mod fiabil prezența virusului în sine. Aceasta este PCR - reacția în lanț a polimerazei.

Esența acestei metode constă în faptul că, în anumite condiții, se produc lanțuri de ARN. Acest lucru se datorează faptului că există fragmente de particule virale în sânge sau în biopsia studiată. Atunci când sunt combinate cu unele molecule din mediu, are loc sinteza lanțurilor complementare ARN-ului viral. Atunci când acestea sunt ulterior analizate și comparate cu secvența de nucleotide cunoscută a virusului hepatitei C, este posibil să se determine dacă acest virus este prezent în organism și dacă este prezentă afectarea ficatului.

PCR se efectuează după detectarea în sânge a anticorpilor specifici împotriva virusului hepatitei. După test, se emite un rezultat - ARN „detectat” sau „nedetectat”. Ocazional, se poate spune „material insuficient” - în acest caz, este necesară o a doua analiză pentru hepatita C.

Dacă numărul de particule virale este mai mic decât numărul minim necesar, atunci putem spune că nu există hepatită, iar cantitățile minime de material genetic ar putea fi „confuze” din cauza mimetării materialului genetic sau a unor secvențe de nucleotide care ar putea coincide accidental cu cel al virusului.

1. Cu PCR rezultat negativ poate fi observată atunci când există într-adevăr particule virale în sânge, dar acestea sunt atât de puține (infecția a avut loc recent sau analiza a fost precedată de o terapie antivirală lungă și intensivă) încât sistemul de testare pur și simplu nu a putut determina concentrația lor în mod normal. ARN - „nu a fost găsit”.
2. Dacă PCR are un rezultat pozitiv, atunci există atât de multe particule virale în sânge încât numărul lor depășește pragul de sensibilitate inferior al sistemului de testare. În acest caz, riscul de a dezvolta un proces infecțios este mare (sau este deja prezent într-un stadiu destul de avansat). De obicei, o cantitate mare de virus este deja o indicație pentru tratament și transplantul de ficat ulterior.

Uneori, testul poate deveni fals pozitiv sau fals negativ.

Rezultat fals negativ PCR pentru hepatită observat atunci când anumite componente sunt prezente în mediul de reacție care inhibă formarea de copii ale particulei virale. Din această cauză, nu se poate obține o imagine fidelă a stării sângelui, care contribuie la trecerea virusului și la progresia bolii. Prezența heparinei în sânge poate afecta și reacția (datorită scăderii vâscozității relative a sângelui). O interpretare incorectă a analizei este posibilă și atunci când nu au fost îndeplinite condițiile de transport și depozitare a materialului de testat.

Rezultate fals pozitive atunci când hepatita C este diagnosticată, PCR dă cel mai adesea atunci când eprubeta sau mediul de lucru este contaminat. În plus, rezultate pozitive pot fi observate în prezența virusurilor hepatitei din alte grupuri (datorită reacției încrucișate).

Analiza PCR calitativă pentru depistarea hepatitei C

Prezența în sânge un numar mare crioglobulinele afectează, de asemenea, în mod direct desfășurarea PCR. Din acest motiv, înainte de a efectua C, este imperativ să se determine concentrația lor în sânge pentru a identifica în prealabil distorsiunea rezultatului și pentru a o preveni.

După efectuarea acestor teste, devine clar dacă există particule virale în sânge. La determinarea acestora, se recomandă începerea imediată a terapiei antivirale pentru a încetini progresia procesului. Spre deosebire de hepatita B, nu există un tratament complet pentru hepatita C; boala trece doar într-un stadiu latent și începe să meargă mai încet. Leziunile hepatice sunt inevitabile. În ultima etapă a procesului, când ficatul nu mai poate face față funcției sale, poate fi necesar să fie transplantat.

Tratamentul se efectuează în principal cu două medicamente - interferon și ribavirină.

Eficiența lor în încetinirea procesului de afectare a hepatocitelor a fost dovedită. Pe parcurs, terapia cu perfuzie este prescrisă în mod necesar pentru a facilita activitatea ficatului.

Toți pacienții care au înregistrat o creștere a numărului de particule virale în sânge trebuie să fie înregistrați la un hepatolog. De câteva ori pe an, li se recomandă să se supună unei examinări preventive pentru a determina progresia procesului și pentru a identifica în timp util indicațiile pentru transplant. În plus, se pot folosi și hepatoprotectoare, deși opiniile medicilor diferă oarecum. Unii cred că aceste medicamente vă permit să opriți procesul și să protejați hepatocitele care nu au fost încă afectate; alții sunt convinși că nu are sens să le luăm și ar trebui efectuată terapie antivirală intensivă.

Astfel, hepatita C aparține categoriei de boli, a căror identificare este oarecum dificilă. Îmbunătățirea metodelor de diagnosticare, precum și examinările preventive în timp util vor reduce incidența acestei boli. Prevenirea acestei boli este, de asemenea, importantă. Este necesar să evitați cu atenție contactul cu sângele, să refuzați să luați medicamente, numai atunci această boală va fi eradicată. Principalul lucru în prevenire și tratament este atitudinea conștientă a pacientului față de sănătatea sa.

În hepatita C, testarea ARN este cea mai importantă și precisă metodă pentru determinarea duratei cursului bolii. Acest studiu vă permite să determinați metoda necesară de tratament. Mai multe teste de sânge sunt utilizate în mod obișnuit pentru a diagnostica boala:

• markeri de hepatită C – utilizați la prima suspiciune de prezență a bolii;
• Studiul ARN al virusului hepatitei C.

Hepatita virala

Hepatita virală C este o boală infecțioasă care afectează ficatul. Principala cale de infectare este ingestia de sânge infectat. Acest lucru se poate întâmpla în timpul unei transfuzii de sânge din cauza instrumentelor medicale nesterile. Uneori boala se transmite prin actul sexual neprotejat sau în timpul nașterii de la o mamă infectată la copilul ei.

Boala este periculoasă pentru forma sa cronică. Poate dura toată viața și provoacă disfuncție hepatică severă, ciroză sau cancer. Aproximativ 80% dintre persoanele infectate au o formă cronică a bolii.

Principalul pericol al bolii constă în forma latentă a bolii, fără simptome evidente. Uneori temperatura crește, apar greață și vărsături, slăbiciune fizică, oboseală crește, pofta de mâncare și pierderea în greutate. Țesutul hepatic din această boală se caracterizează printr-o ușoară compactare, în urma căreia celulele sale degenerează malign. Dezvoltarea bolii este foarte lentă și poate dura câteva decenii.

Definiția ARN

Ce este ARN-ul hepatitei C și de ce ar trebui testat? Orice virus este cea mai mică particulă de ARN. Determinarea ARN-ului virusului este în esență un studiu biologic al celulelor sanguine pentru a determina prezența în organism a materialului genetic al virusului hepatitei C. Pentru aceasta se folosește metoda reacției în lanț a polimerazei. Există 2 tipuri de teste pentru determinarea ARN-ului virusului hepatitei C.

Un test calitativ determină prezența unui virus în celule sistem circulator. Un test pozitiv indică faptul că virusul se înmulțește activ în sânge, infectând celulele hepatice sănătoase. Terapia antivirală presupune trecerea acestui test în perioada 4, 12 și 24 de săptămâni de tratament. După oprirea tratamentului, analiza se face și după 24 de săptămâni, apoi 1 dată pe an.

Se efectuează un test cantitativ pentru a determina concentrația (conținutul specific) virusului hepatitei C în sânge. Adică, se determină cantitatea de ARN viral dintr-o anumită cantitate de sânge. Severitatea bolii nu depinde de cantitatea de virus. Această analiză este efectuată pentru a determina gradul infecțios al bolii. Determină succesul tratamentului și durata terapiei antivirale și se efectuează înainte de începerea acestuia și la 3 luni după terminarea acestuia.

Până în prezent, se cunosc 10. Genotiparea ARN viral face posibilă diagnosticarea prezenței tipuri diferite boli. Tipul genetic al virusului este decisiv în stabilirea momentului de terapie. Tratamentul selectat corespunzător poate oferi o garanție de 90% a recuperării complete.

Virusul hepatitei C (VHC) este un virus ARN din familia Flaviviridae. Această infecție este capabilă să se înmulțească în celulele sanguine (monocite, neutrofile, limfocite B și macrofage), precum și să infecteze celulele ficatului însuși - hepatocite. Mulțumită grad înalt activitate mutațională, acest tip de hepatită este capabil să evite efectele sistemului imunitar uman.

Există 11 genotipuri și o mulțime de subtipuri ale unui astfel de virus, care diferă în gradul de afectare a ficatului și afectează momentul tratamentului hepatitei. Această diversitate a hepatitei C necesită metode diferite de terapie antivirală. De exemplu, genotipurile hepatitei 1 și 4 trebuie tratate timp de 48 de săptămâni, iar pentru un curs de terapie împotriva virusurilor de tipul 2 și 3, poate dura doar 24 de săptămâni.

După ce un test rapid pentru hepatita C a dat un rezultat pozitiv, se efectuează o analiză PCR pentru a detecta ARN-ul acestui virus în probele de sânge.

Diagnosticare PCR

Reacția în lanț a polimerazei (PCR) este o tehnică experimentală pentru detectarea virusurilor. O astfel de analiză pentru hepatita C vă permite să creșteți semnificativ concentrația anumitor fragmente de ADN sau ARN ale virusului în probele trimise. Acest lucru face posibilă recunoașterea acestora și chiar numărarea numărului.

Acest test pentru hepatita C se efectuează după următoarea metodă:

1. O probă de sânge (material genetic), care poate conține gena dorită a hepatitei, este introdusă într-o eprubetă. Pe ea sunt plasate substanțe speciale - primeri, sunt segmente de lungime scurtă din gena dorită, care sunt sintetizate chimic. În acest vas se adaugă și ADN-ul sau ARN polimeraza, acesta fiind capabil să construiască lanțuri de acizi nucleici complet identici cu originalul. La compoziția rezultată se adaugă o selecție de nucleotide libere, care sunt deosebite material de construcții pentru ADN și ARN, iar una dintre ele conține cele mai mici particule de fosfor radioactiv.
2. Amestecul rezultat este mai întâi încălzit la 95 de grade, în urma căruia ambele fire de ADN, împletite în stare normală, se desfășoară datorită unui astfel de impact.
3. Pentru a continua analiza, preparatul este răcit, în acest moment primerii sunt atașați de secțiunea dorită a genomului virusului hepatitei, împiedicând formarea ADN-ului într-o dublă helix. Când amestecul se răcește, polimeraza caută exact lanțuri unice de nucleotide. În timpul atașării acestei enzime, ea alunecă de-a lungul lanțului ADN (ca un bloc pe o frânghie), iar pe un dublu helix nu este capabil să „lucreze”, pentru aceasta amestecul este încălzit.
4. Pentru extinderea analizei se efectuează reîncălzirea, ceea ce duce din nou la separarea lanțurilor de nucleotide. Când astfel de cicluri PCR sunt efectuate în probă, numărul genelor de hepatită dorite crește în proporții geometrice, iar restul materialelor genetice sunt produse (formate) doar într-un model liniar.
5. Pentru a finaliza studiul, soluția este purificată din particule reziduale de nucleotide. Ele sunt separate prin electroforeză, cu separarea în funcție de parametrii greutății moleculare a lanțurilor de ADN. Astfel de teste pentru hepatita C folosind PCR fac posibilă determinarea dacă genele virale dorite sunt prezente sau nu în proba de testare.

Avantajul acestui test este pragul de sensibilitate foarte mare al reacției PCR. În mod ideal, o astfel de tehnică de diagnosticare necesită un singur genom de virus pentru întreaga probă.

În plus, o astfel de PCR este complet specifică. Fiecare dintre gene are o secvență unică de nucleotide, care, ca o amprentă digitală, nu poate fi repetată nicăieri. Pentru acest test de hepatită C, primerii sunt sintetizați în așa fel încât să se potrivească absolut cu regiunile unice ale genelor de interes pe care nicio altă secvență nu le are.

Această tehnică vă permite, de asemenea, să analizați hepatita B C și să le determinați, ajutând la stabilirea diagnosticului final.

Această analiză de laborator oferă mai multe informații decât prezența sau absența ARN-ului VHC sau a unui alt tip de ARN în probele de sânge. Prin determinarea parametrului radiației radioactive, este, de asemenea, posibil să se determine cât de mult din materialul genetic dorit a fost inițial în proba studiată. Acest lucru vă permite să determinați parametrul așa-numitei încărcături virale - concentrația particulelor de ARN din hepatită într-un anumit volum.

Analiza PCR calitativă

Această analiză vă permite să determinați prezența virusului hepatitei în probele de sânge. Ar trebui să se efectueze pentru toate persoanele cărora li s-a constatat că au anticorpi împotriva hepatitei.

Ca rezultat al unui astfel de studiu, pot exista doar două valori:

• „Descoperit”. Un astfel de rezultat pozitiv al testului este interpretat astfel: fragmente de ARN virusului hepatitei au fost găsite în proba analizată din material biologic. De aici rezultă că a existat un fapt de infectare a pacientului cu acest virus. Acest lucru poate indica faptul că agentul cauzal al hepatitei se înmulțește în organism și infectează celule noi, distrugând ficatul.
• "Nu a fost detectat". Acest rezultat indică faptul că în proba care a fost analizată în acest laborator nu s-au găsit fragmente de ARN care sunt specifice virusului hepatitei C. Este, de asemenea, posibil ca concentrația de ARN viral cauzator în proba de testat să fi fost atât de scăzută încât testul nu a putut detectează-l. În astfel de cazuri, se spune că nivelul de concentrație este sub pragul de sensibilitate al testului.

Un astfel de test poate fi și fals pozitiv sau fals negativ, din cauza contaminării biomaterialului sau a prezenței în probe a unor substanțe specifice care reacționează cu componentele chimice necesare analizei.

Trebuie subliniat că în fazele acute ale hepatitei C, un studiu calitativ folosind metoda PCR poate detecta ARN-ul acestuia deja după 1-2 săptămâni de la momentul infectării organismului. Aceasta înseamnă că este posibil să se detecteze boala cu mult înainte de manifestarea simptomelor sale externe sau de apariția anticorpilor împotriva hepatitei în organism.

Prelevarea de sânge (din venă) se efectuează de preferință pe stomacul gol.

Analiza PCR cantitativă

Cu ajutorul acestei analize se determină nivelul de concentrație a virusului hepatitei la un pacient (încărcare virală). Un astfel de test trebuie trecut pentru a evalua cantitatea de ARN viral dintr-o unitate de un anumit volum.

Testele de descifrare pentru hepatita C, efectuate conform acestei metode, pot avea următoarele rezultate:

Analiza PCR cantitativă efectuată în diferite perioade ale terapiei antivirale (săptămânile 1, 4, 12 și 24) face posibilă evaluarea eficacității tratamentului și efectuarea ajustărilor necesare.

Specificul analizei

Acest test trebuie efectuat pentru a determina diferitele genotipuri ale hepatitei C. În prezent, sunt cunoscute 11 genotipuri ale acestui agent patogen și multe subtipuri. În țara noastră sunt frecvente genotipurile hepatitei C de tipul 1, 2 și 3. În laboratoare pot fi detectate diferite subtipuri ale acestor specii: 1a, 1c, 2a, 2c sau 3, 4, 5, 6 genotipuri cu diferite modificări de subtip. Pentru toate aceste hepatite, specificitatea determinării este de 100%.

Clarificarea modificării genotipului face posibilă selectarea tratamentului adecvat. Prezența anumitor tipuri de genotip la un pacient nu indică faptul că boala este mai ușoară sau mai dificilă, sunt doar soiuri ale virusului hepatitei și nu mai mult.

În cazurile în care laboratorul nu poate izola genotipul virusului, se poate emite rezultatul: „Netipizat. Au fost investigate genotipurile: așa și așa” (de exemplu, 1a, 2c, 3av). Această transcriere indică faptul că în acest laborator nu existau reactivi corespunzători care să poată determina genotipul virusului hepatitei. În timpul studiului s-a făcut o verificare pentru virusurile indicate în listă, dar nu a fost identificată corespondența acestora cu probele de ARN.

Pentru a pune un diagnostic definitiv, un singur tip de analiză nu este suficient. Fiecare dintre teste poate da un rezultat fals pozitiv. Pentru a determina cu exactitate tipul de hepatită și gradul de deteriorare a organismului prin această infecție, se efectuează un studiu cuprinzător. În acest caz, se face o biopsie hepatică și se testează enzimele acestuia: ALT, AST, precum și fosfatază alcalină și LDH. De asemenea, pot fi efectuate un test de bilirubină și o analiză a indicelui de protrombină.

Doar un set de astfel de teste și studii de laborator, cu o analiză generală a stării pacientului, va ajuta la determinarea prezenței hepatitei în organism, a formei și a severității acesteia. Pe baza acestora, medicul poate stabili un tratament suplimentar și poate face un posibil prognostic pentru pacient.

Este un virus care conține o moleculă de ARN. Este capabil să evite răspunsul imun al organismului datorită capacității sale mari de a muta. Există șase genotipuri principale ale virusului și multe subtipuri. În regiunea noastră, genotipurile 1, 2 și 3 sunt distribuite în principal.

În 75-80%, boala devine cronică, ceea ce provoacă o afecțiune în care țesutul hepatic este înlocuit cu țesut conjunctiv. Fibroza, la rândul său, duce la cancer sau ciroză. Principala cale de transmitere a bolii este prin sânge. Dacă o persoană este eligibilă pentru un test de hepatită C, va avea două teste principale. Se determină anticorpi împotriva virusului, iar în lipsa acestora se consideră că nu are hepatită. Dacă în sânge este detectată prezența anticorpilor împotriva virusului hepatitei, se efectuează o analiză PCR.

ARN-ul este determinat prin această metodă în sânge încă de la 10-12 zile după infectare și indică faptul că virusul se înmulțește activ în organism. În această perioadă, este pur și simplu imposibil de detectat virusul în alt mod, deoarece nu produce încă anticorpi specifici, iar afectarea ficatului este încă invizibilă în testele biochimice și biopsii.

Varietăți de studii PCR

Analiza PCR are anumite avantaje:

1. Într-un astfel de studiu, se realizează definiția virusului în sine, și nu produsele activității sale vitale. În acest caz, este posibil să se determine tipul de agent patogen.
2. Tehnica are o specificitate ridicată datorită faptului că doar o anumită secțiune de ADN este examinată, probabilitatea de a obține rezultate eronate este redusă.
3. Are o sensibilitate foarte mare, se determină chiar și cantitatea minimă de virus din sânge.

Există două metode principale de testare a sângelui pentru hepatita C folosind PCR: analiza PCR calitativă și cantitativă. O metodă calitativă este utilizată pentru a determina dacă un virus este prezent. Toți cei care au anticorpi împotriva hepatitei în sânge sunt supuși unei astfel de analize. Rezultatul poate fi doar de două tipuri: „găsit” și „nu găsit”, ultima valoare considerată norma.

Un rezultat pozitiv al testului înseamnă că în probă au fost găsite fragmente de ARN ale virusului, ceea ce, la rândul său, indică faptul că persoana a fost infectată cu hepatită. În cazul unui rezultat negativ, sunt posibile două opțiuni: nu a existat nicio infecție sau concentrația sa este atât de scăzută încât nu este detectată prin această metodă.

Metoda cantitativă diferă prin esența studiului, prin obiectivele și indicațiile acestuia. Nu toți pacienții cu hepatită sunt supuși unei astfel de analize. El, ca oricare altul, are anumite scopuri. Se utilizează determinarea încărcăturii virale sau analiza cantitativă a PCR pe ARN-ul virusului:

• pentru a determina ARN-ul virusului în sânge și a pune un diagnostic de „hepatită virală”;
• pentru a prezice cronicitatea hepatitei și evoluția bolii;
• să monitorizeze tratamentul antiviral și să ia decizii cu privire la extinderea, reducerea sau modificarea tacticii de tratament.

Studiul se efectuează în prezența unor astfel de indicații:

• hepatita C a fost depistată în timpul unui studiu calitativ și s-au găsit anticorpi în sânge;
• cu hepatită mixtă;
• dacă este planificată o terapie antivirală;
• în timpul și după tratamentul pentru hepatita C;
• în prezența hepatitei C cronice și acute.

Testul este efectuat pentru a evalua numărul de unități de virus dintr-un volum dat dintr-o probă de sânge de 1 cm³ sau 1 ml. Rezultatele sunt date în cifre. Indicatorii utilizați sunt: ​​UI/ml, ceea ce înseamnă unitate internațională pe mililitru și copii pe ml, numărul de copii de ARN în 1 ml de probă. Cu cât indicatorul cantitativ al analizei este mai mare, cu atât este mai mare probabilitatea transmiterii virusului către o altă persoană.

R-DNA - metoda ADN-ului ramificat. O metodă mai ușoară și mai puțin costisitoare. Folosit pentru un număr mai mare de probe, are o sensibilitate scăzută, de la 500 UI/ml. Cu această sensibilitate, există șansa ca virusul să nu fie detectat, chiar dacă este prezent în sânge.

TMA - metoda de amplificare transcripțională. Această tehnică detectează acizii nucleici din sânge. Are un cost redus și în același timp o sensibilitate ridicată, de la 5–10 UI/ml. O tehnică relativ nouă care vă permite să accelerați și să reduceți costul procesului de testare.

Rezultatele analizei cantitative a determinării ARN virusului, prezentate de laborator, sunt descifrate după cum urmează:

Valoarea numerică a cantității de virus, UI / ml	Descifrarea rezultatelor
Nu a fost detectat	Norma pentru oameni sanatosi. Valoarea virusului este sub limita de sensibilitate a metodei sau este absent cu totul.
Până la 1,8*10^2	Concentrația este sub intervalul liniar.
Până la 8*10^5	Virusul a fost găsit în sânge. Sarcina virală este scăzută.
Peste 8*10^5
Peste 2,4*10^7	Virus detectat. Viremia este mare, peste intervalul liniar.

Rezultatele analizelor cantitative pot fi transmise atât în ​​unități de UI/ml, cât și în copii pe ml. În același timp, factorul de conversie diferă de obicei pentru diferite laboratoare și metode. Valorile sale variază de la unu la cinci, este în general acceptat că, în medie, 1 UI este de 4 copii pe ml.

Aplicabilitatea testării viremiei în diferite etape

Testul este utilizat pentru a detecta infecția activă în organism. În funcție de rezultatul său, se poate judeca care este probabilitatea de transmitere a virusului. Acest lucru este important, de exemplu, în timpul sarcinii, când vorbim despre posibilitatea de infectare a unui copil de la o mamă cu hepatită.

Analiza se efectuează numai după detectarea prezenței anticorpilor împotriva virusului în sânge. Este necesar pentru că până la 25% dintre persoanele care au avut o formă acută de hepatită se recuperează singure, iar ei nu au virusul în testele de laborator. Rezultatele sunt folosite pentru a evalua eficacitatea tratamentului și înainte de acesta.

Diagnosticul PCR este efectuat înainte de tratament pentru a determina ulterior eficacitatea acestuia. Probabilitatea unui rezultat favorabil al tratamentului este invers proporțională cu acest parametru. Cu cât este mai mare, cu atât prognosticul este mai rău.

În timpul tratamentului, analiza se efectuează la 1, 4, 12, 24 de săptămâni. Tratamentul produce un răspuns virologic complet, cu condiția ca încărcătura virală să nu fie determinată de o astfel de analiză.

Dacă la 12 săptămâni după începerea terapiei, indicatorul nu scade cu două unități logaritmice, atunci cel mai probabil această terapie nu va ajuta în acest caz particular.

În analize, o scădere a încărcăturii virale pe unitate logaritmică este exprimată ca o scădere a numărului de zerouri din rezultat cu unu. De exemplu, de la 1.000.000 UI, ar trebui să scadă la 100.000 UI.

După tratament se determină detectarea recăderilor. Deci, abaterea acestui parametru de la normă indică faptul că cantitatea de virus din organism crește și, astfel, boala se întoarce.

Unii indicatori pot afecta rezultatul. În primul rând, aceasta este o posibilă eroare a laboratorului, încălcări ale regulilor de efectuare a cercetării, standarde pentru păstrarea și pregătirea probelor, precum și:

• contaminarea probei de biomaterial;
• prezența urmelor reziduale de heparină în sânge;
• prezența în sânge a inhibitorilor - substanțe care sunt compuși chimici sau proteine ​​care afectează componentele PCR.

Rezultatele studiului pot diferi și pentru diferite laboratoare, ceea ce se datorează utilizării diferiților reactivi și din alte motive. Acest fenomen este absolut normal. Prin urmare, pentru a evalua corect eficacitatea tratamentului, merită analizat în același laborator.

Note importante despre metodologia de cercetare:

• Nivelul încărcăturii virale nu poate fi utilizat pentru a evalua gradul de afectare a ficatului sau severitatea evoluției hepatitei în sine. Pentru a evalua acești indicatori, este necesar să se efectueze studii suplimentare, cum ar fi un test de sânge biochimic, biopsie, elastometrie și altele.
• La planificarea și terapia antivirală, pe lângă indicatorul viremiei, este important să se determine genotipul virusului.