Virus hepatitisa s kvalitativnom RNA nije otkriven. Dijagnoza hepatitisa C pomoću PCR studije

Hepatitis C je upala jetrenih stanica koja nastaje kao posljedica infekcije virusom HCV (hepatitis C) u kontaktu s krvlju zaražene osobe. Genetski kod HCV flavivirusa nosi molekula RNA (ribonukleinska kiselina) sadržana u strukturi virusa. Ovaj po život opasan fenomen odlikuje se tajnovitošću početno stanje patologija. Vremenski interval između infekcije i pojave simptoma (odgovor imunološki sustav) može varirati od mjesec dana do šest mjeseci. U pravilu, bolest poprima kronični oblik i teško je izliječiti.

Moderna medicina omogućuje dijagnosticiranje patologije s manjim oštećenjem jetre. na najčešće i učinkovite metode dijagnoza uključuje PCR analizu. Razmotrimo u ovom članku što je to i koje njegove sorte postoje.

Što je istraživanje

PCR analiza za hepatitis C je laboratorijski test koji otkriva flavirus, genetski materijal virusa ribonukleinske kiseline (RNA). Određuje broj molekula RNA u krvi, kvalitetu biološkog materijala, genetski tip HCV flavirusa.

PCR metoda za hepatitis C omogućuje otkrivanje minimalne količine flavirusa čak i prije stvaranja protutijela, u pravilu, ubrzo nakon infekcije.

Studija se često naziva RNK analiza, budući da otkriva čestice ribonukleinske kiseline veličine 30-60 nm sadržane u flavavirusu.

Studija se provodi na sljedeći način: na prazan želudac pacijent daje krv iz vene, koja se zatim testira različitim metodama:

• Real-Time PCR se izvodi na zatvoren, automatiziran način i ima donju granicu detekcije za RNA virus od 15 IU/mL;
• COBAS AMPLICOR s osjetljivošću od 50-100 IU/ml.

Što je viši prag osjetljivosti dijagnostičke tehnike, to je vjerojatnije da će se otkriti vrlo minimalni sadržaj virusa u biološkom materijalu koji se proučava.

Koje se vrste analiza koriste

Analiza koja se uspješno koristi već nekoliko desetljeća naziva se PCR hepatitis, a otkriva se vrlo jednostavno i brzo. U medicini postoje dvije metode za provođenje reakcije, koje se bitno razlikuju jedna od druge:

• kvalitativna metoda otkriva prisutnost genetskog izvora određenog virusa u biološkom materijalu;
• kvantitativna analiza mjeri količinu genetske tvari, omogućujući određivanje stadija patologije ili procjenu učinkovitosti tekućeg terapijskog tečaja;
• genotipizacija određuje tip virusa prisutan u tijelu.

Općenito, krvni test pomaže identificirati prirodu viremije i genetski tip patogena. U pravilu se studija provodi 1 put, ovisno o stupnju osjetljivosti dijagnostičkog sustava. Ako je potrebno, ponovno testirajte pomoću ultraosjetljivog reagensa.

Kvalitativni PCR

Što je kvalitativna PCR RNA za hepatitis C? Bit reakcije leži u prisutnosti sekvence RNA hepatitisa, a reakcija je moguća samo u prisutnosti virusnih proteina slične etimologije u ELISA testu. U procesu usporedbe otkriva se opterećenje i moguća oštećenja područja jetre.

Posebnost ovu metodu je sposobnost otkrivanja čak i prisutnosti jednog gena.

Treba napomenuti da nakon rezultata PCR studije i ELISA-e, pacijentu je potrebno odgovarajuće liječenje, bez obzira na to kakav je konačni rezultat ELISA-e. Pozitivan označava infekciju, a PCR negativan ukazuje na smanjeni broj virusnih čestica u odnosu na razinu osjetljivosti.

Postoji nekoliko uvjeta koji utječu na dobivanje negativnog PCR i ELISA testa:

• nedostatak odgovarajućih uvjeta za prikupljanje građe;
• dobivena analiza sadrži kontaminaciju;
• u slučaju ranog davanja injekcija heparina bolesniku.

Pacijent nije dužan pridržavati se određenih pravila za uzimanje krvi za PCR analizu, u ovom slučaju kvaliteta ove analize ovisi o medicinskom radniku koji provodi postupak. Sposobnost utvrđivanja prisutnosti bolesti (osobito u akutnom obliku) pojavljuje se unutar nekoliko tjedana nakon infekcije.

Kvantitativna analiza

Preporuča se kvantitativni test za otkrivanje virusnog opterećenja neposredno prije formiranja daljnje terapije i odgovora tijela. Proces vađenja krvi provodi se na isti način kao i kod kvalitetnih PCR i ELISA, jedini uvjet je da pacijent nema priliku pušiti prije postupka.

Što se tiče karakteristika podataka dobivenih kao rezultat studije, povećano opterećenje karakteriziraju pokazatelji od 800 000 IU / ml, nisko - 400 000 IU / ml. Prisutnost virusa u tijelu pacijenta pokazuje PCR za hepatitis, nenegativni kvalitativni test.

Ova vrsta studije omogućuje da se utvrdi koliko je pacijent opasan za ljude oko sebe. Tako, na primjer, otkrivanje visoke razine ukazuje na povećanu zaraznost pacijenta. Osim toga, rezultati analize pomažu u formiranju daljnjeg najviše učinkovito liječenje te utvrditi koliko je učinkovita dostupna terapija.

Brz negativan odgovor testa ukazuje na uspješnost odabrane tehnike, a spor na potrebu prilagodbe i primjene svestranog tretmana.

Proces provođenja postupka uzimanja analize ovisi o određenom danu tijeka bolesti. Prvo određivanje provodi se prvi dan nakon prijema bolesnika u bolnicu, zatim se postupak ponavlja nakon 4, 12 i 24 tjedna od početka uzimanja lijeka.

Dakle, kvantitativna analiza pokazuje koji je tretman najučinkovitiji, trajanje dostupne terapije, te rizik pacijenta u odnosu na druge ljude.

Genotipizacija

Prilikom ispitivanja materijala za analizu važno je utvrditi točnost genotipa virusa koji se odvija. Trenutno postoji 11 varijanti virusa hepatitisa C, koji zauzvrat uključuju određene podvrste.

Sve te vrste različito reagiraju na razne načine liječenju, dok su neke sorte apsolutno otporne na mnoge lijekove.

Genotip omogućuje određivanje i prikaz stanja jetre. Nije neuobičajeno da rezultati zabilježe "not typed", što znači da ovaj test sustav ne detektira virus u krvi pacijenta. To se može otkriti ako određeni genotip ne odgovara određenoj zoni. U takvoj situaciji ponovno se provodi uzorkovanje analize, dok se za proučavanje materijala koristi osjetljiviji sustav.

Ultraosjetljiva metoda

Ultrasenzitivna metoda je neophodna u određenim slučajevima kada se dijagnoza hepatitisa ne može postaviti drugim metodama, a kada treba napraviti test određuje liječnik:

• ako se sumnja na prisutnost virusa hepatitisa C u bolesnika s latentnim tipom bolesti;
• prisutnost protutijela protiv virusa hepatitisa C, koja nije potvrđena PCR dijagnostikom;
• kako bi se utvrdila kvaliteta učinkovitosti odabrane metode liječenja i potvrdila činjenica otklanjanja bolesti.

Osjetljivost ove metode mnogo je veća od onih koje se inače koriste, ali ova metoda ne isključuje lažne rezultate, kako pozitivne tako i negativne. U takvoj situaciji važno je kontrolirati kvalitetu postupka i mogućnost kontaminacije samog materijala.

Dešifriranje PCR analize

Dekodiranje analize provodi se na temelju prezentiranih materijala, dok rezultati laboratorijskih studija uključuju određene gore opisane podatke.

Dešifriranje može uključivati ​​identifikaciju pozitivne PCR lančane reakcije polimeraze u testu i negativna vrijednost ELISA znači da pacijent nema znakove hepatitisa C u krvi, ali je u prošlosti bio nositelj oštar oblik ove bolesti. U pravilu, pri dijagnosticiranju, stručnjaci pribjegavaju korištenju pokazatelja PCR testova.

Rezimirajući sve gore navedeno, možemo zaključiti da je prilikom provođenja analize važno pridržavati se svih pravila i preporuka kako bi dobiveni rezultati bili što točniji, a na temelju dobivenih podataka moguće je utvrditi učinkovitost primijenjene terapije i daljnje šanse za potpuni oporavak.

Ne znaju svi zašto koriste PCR dijagnostičku metodu za hepatitis C. Jedna od raširenih skupina bolesti su zarazne bolesti gastrointestinalnog trakta. Najčešće pate želudac (čir), crijeva (kolitis, enteritis) i jetra (hepatitis).

Među svim navedenim organima najveći teret nosi jetra. Uloga jetre u organizmu je izuzetno važna:

1. Gotovo sve metaboličke reakcije odvijaju se u jetri (tu se formiraju sve vrste vitalnih komponenti koje omogućuju potpuno funkcioniranje tijela).
2. Jetra je glavni organ za detoksikaciju. Uz njegovu pomoć (osobito kroz žuč) uklanjaju se mnogi supstrati koji mogu uzrokovati trovanje i dovesti do ozbiljnih posljedica.

Nažalost, mnogi ljudi ne vode brigu o svom zdravlju, zbog čega jetra počinje patiti. Obično se razvija hepatitis različite etiologije (virusni, toksični).

Definicija hepatitisa

zauzimaju važno mjesto među bolestima jetre. Ozbiljnost tijeka bolesti, složenost liječenja stavljaju ih na prvo mjesto među patologijama različite prirode ovog organa.

Svi hepatitisi se dijele na akutne i kronične. U akutne se svrstavaju hepatitis A i B. Među kroničnim na prvom je mjestu hepatitis C.

Ovu bolest uzrokuje virus hepatitisa C. karakteristična značajka je li to bolest dugo vremena može se pojaviti bez ikakvih kliničkih manifestacija.

Prenosi se uglavnom putem krvi. S krvotokom virus se prenosi u jetru, gdje se počinje razmnožavati u njezinim stanicama. Kao rezultat nakupljanja viriona, zaraženi hepatocit se uništava. Kao odgovor na to počinju se stvarati antitijela koja počinju napadati ostatke hepatocita. Zbog toga se tijekom vremena nakuplja nakupina protiv stanica jetre, što pogoršava tijek bolesti.

S obzirom na to da je bolest asimptomatska ili asimptomatska, te da se klinički znakovi javljaju tek kod značajnog oštećenja stanica, ova bolest zahtijeva razvoj dijagnostičkih metoda za otkrivanje njezine prisutnosti i poduzimanje odgovarajućih mjera.

Dijagnostika hepatitisa C: kvalitativni i kvantitativni testovi

Trenutno se koriste metode kao što su biopsija jetre, imunogram.

Omogućuju izravno određivanje prisutnosti zahvaćenih hepatocita (pregled biopsije jetre) ili specifičnih protutijela protiv zahvaćenih stanica (imunogram). Međutim, postoji metoda koja vam omogućuje pouzdano određivanje prisutnosti samog virusa. Ovo je PCR - lančana reakcija polimeraze.

Bit ove metode leži u činjenici da se pod određenim uvjetima proizvode lanci RNA. To je zbog činjenice da u krvi ili biopsiji koja se proučava postoje fragmenti virusne čestice. Kada se spoje s nekim molekulama u okolišu, dolazi do sinteze lanaca komplementarnih virusnoj RNK. Kada se naknadno analiziraju i usporede s poznatim nukleotidnim slijedom virusa hepatitisa C, može se utvrditi postoji li ovaj virus u organizmu i postoji li oštećenje jetre.

PCR se provodi nakon otkrivanja specifičnih protutijela protiv virusa hepatitisa u krvi. Nakon testa izdaje se rezultat - RNA "otkrivena" ili "nije otkrivena". Povremeno može pisati "nema dovoljno materijala" - u ovom slučaju potrebna je druga analiza na hepatitis C.

Ako je broj virusnih čestica manji od potrebnog minimalnog broja, tada možemo reći da hepatitisa nema, a minimalne količine genetskog materijala mogle bi biti „pobrkane“ zbog mimikrije genetskog materijala ili nekih nukleotidnih nizova koji bi mogli slučajno podudaraju s virusom.

1. S PCR-om negativan rezultat može se uočiti kada u krvi doista ima virusnih čestica, ali ih je toliko malo (infekcija se nedavno dogodila ili je analizi prethodila duga i intenzivna antivirusna terapija) da testni sustav jednostavno ne može normalno odrediti njihovu koncentraciju. RNA - "nije pronađeno."
2. Ako PCR ima pozitivan rezultat, tada u krvi ima toliko virusnih čestica da njihov broj prelazi donji prag osjetljivosti testnog sustava. U ovom slučaju, rizik od razvoja zaraznog procesa je visok (ili je već prisutan u prilično naprednoj fazi). Obično je velika količina virusa već indikacija za liječenje i kasniju transplantaciju jetre.

Ponekad test može postati lažno pozitivan ili lažno negativan.

Lažno negativan rezultat PCR za hepatitis opaženo kada su u reakcijskom mediju prisutne određene komponente koje inhibiraju stvaranje kopija virusne čestice. Zbog toga nije moguće dobiti pravu sliku stanja krvi, što pridonosi prolazu virusa i napredovanju bolesti. Prisutnost heparina u krvi također može utjecati na reakciju (zbog smanjenja relativne viskoznosti krvi). Pogrešna interpretacija analize moguća je i kada nisu ispunjeni uvjeti za transport i skladištenje ispitnog materijala.

Lažno pozitivne rezultate kada se dijagnosticira hepatitis C, PCR najčešće daje kada je epruveta ili radno okruženje kontaminirano. Osim toga, pozitivni rezultati mogu se uočiti u prisutnosti virusa hepatitisa drugih skupina (zbog križne reakcije).

Kvalitativna PCR analiza za otkrivanje hepatitisa C

Prisutnost u krvi veliki broj krioglobulini također izravno utječu na provođenje PCR. Zbog toga je prije provođenja C nužno odrediti njihovu koncentraciju u krvi kako bi se unaprijed identificiralo iskrivljenje rezultata i spriječilo ga.

Nakon provođenja ovih testova postaje jasno postoje li virusne čestice u krvi. Prilikom njihovog određivanja preporuča se odmah započeti s antivirusnom terapijom kako bi se usporilo napredovanje procesa. Za razliku od hepatitisa B, za hepatitis C ne postoji potpuni lijek; bolest samo prelazi u latentni stadij i počinje se odvijati sporije. Oštećenje jetre je neizbježno. U posljednjoj fazi procesa, kada se jetra više ne može nositi sa svojom funkcijom, možda ju je potrebno presaditi.

Liječenje se provodi uglavnom s dva lijeka - interferonom i ribavirinom.

Dokazana je njihova učinkovitost u usporavanju procesa oštećenja hepatocita. Usput, nužno je propisana infuzijska terapija kako bi se olakšao rad jetre.

Svi pacijenti koji su doživjeli povećanje broja virusnih čestica u krvi moraju biti registrirani kod hepatologa. Nekoliko puta godišnje preporuča se podvrgnuti preventivnom pregledu kako bi se utvrdilo napredovanje procesa i pravovremeno identificirali indikacije za transplantaciju. Osim toga, mogu se koristiti i hepatoprotektori, iako se mišljenja liječnika donekle razlikuju. Neki vjeruju da ti lijekovi omogućuju zaustavljanje procesa i zaštitu hepatocita koji još nisu pogođeni; drugi su uvjereni da ih nema smisla uzimati i treba provoditi intenzivnu antivirusnu terapiju.

Dakle, hepatitis C spada u kategoriju bolesti čija je identifikacija donekle teška. Usavršavanjem dijagnostičkih metoda, kao i pravovremenim preventivnim pregledima smanjit će se učestalost ove bolesti. Važna je i prevencija ove bolesti. Potrebno je pažljivo izbjegavati kontakt s krvlju, odbiti uzimanje lijekova, tek tada će se ova bolest iskorijeniti. Glavna stvar u prevenciji i liječenju je svjestan stav pacijenta prema njegovom zdravlju.

Kod hepatitisa C, RNA testiranje je najvažnija i najtočnija metoda za određivanje trajanja tijeka bolesti. Ova studija vam omogućuje da odredite potrebnu metodu liječenja. Za dijagnosticiranje bolesti obično se koristi nekoliko krvnih pretraga:

• markeri hepatitisa C - koriste se pri prvoj sumnji na prisutnost bolesti;
• RNK studija virusa hepatitisa C.

Virusni hepatitis

Virusni hepatitis C je zarazna bolest koja zahvaća jetru. Glavni put infekcije je gutanje zaražene krvi. To se može dogoditi tijekom transfuzije krvi zbog nesterilnih medicinskih instrumenata. Ponekad se bolest prenosi nezaštićenim odnosom ili tijekom poroda sa zaražene majke na dijete.

Bolest je opasna za kronični oblik. Može trajati cijeli život i uzrokuje ozbiljne poremećaje jetre, cirozu ili rak. Oko 80% zaraženih osoba ima kronični oblik bolesti.

Glavna opasnost od bolesti leži u latentnom obliku bolesti, bez očitih simptoma. Ponekad se povećava temperatura, javljaju se mučnina i povraćanje, jača tjelesna slabost, umor, gubitak apetita i težine. Tkivo jetre u ovoj bolesti karakterizira lagano zbijanje, zbog čega njegove stanice maligno degeneriraju. Razvoj bolesti je vrlo spor, i može trajati nekoliko desetljeća.

definicija RNA

Što je RNA hepatitisa C i zašto je treba testirati? Svaki virus je najmanja čestica RNK. Određivanje RNA virusa u biti je biološka studija krvnih stanica kako bi se utvrdila prisutnost u tijelu genetskog materijala virusa hepatitisa C. Za to se koristi metoda lančane reakcije polimeraze. Postoje 2 vrste testova za određivanje RNK virusa hepatitisa C.

Kvalitativni test utvrđuje prisutnost virusa u stanicama Krvožilni sustav. Pozitivan test pokazuje da se virus aktivno umnožava u krvi, inficirajući zdrave stanice jetre. Antivirusna terapija podrazumijeva polaganje ovog testa u razdoblju od 4, 12 i 24 tjedna liječenja. Nakon prestanka liječenja, analiza se također radi nakon 24 tjedna, a zatim 1 puta godišnje.

Kvantitativnim testom utvrđuje se koncentracija (specifični sadržaj) virusa hepatitisa C u krvi. Odnosno, određuje se količina virusne RNK u određenoj količini krvi. Ozbiljnost bolesti ne ovisi o količini virusa. Ova analiza se provodi kako bi se utvrdio zarazni stupanj bolesti. Određuje uspješnost liječenja i trajanje antivirusne terapije, a provodi se prije njezina početka i 3 mjeseca nakon završetka.

Do danas je poznato 10. Genotipizacija virusne RNA omogućuje dijagnosticiranje prisutnosti različiti tipovi bolesti. Genetski tip virusa odlučujući je u određivanju vremena terapije. Ispravno odabrani tretman može dati 90% jamstvo potpunog oporavka.

Virus hepatitisa C (HCV) je RNA virus iz porodice Flaviviridae. Ova infekcija može se razmnožavati u krvnim stanicama (monocitima, neutrofilima, B-limfocitima i makrofagima), kao i zaraziti stanice same jetre - hepatocite. Zahvaljujući visok stupanj mutacijske aktivnosti, ova vrsta hepatitisa može izbjeći učinke ljudskog imunološkog sustava.

Postoji 11 genotipova i puno podtipova takvog virusa, koji se razlikuju po stupnju oštećenja jetre i utječu na vrijeme liječenja hepatitisa. Ova raznolikost hepatitisa C zahtijeva različite metode antivirusne terapije. Na primjer, genotipove hepatitisa 1 i 4 potrebno je liječiti 48 tjedana, a za tijek terapije protiv virusa 2. i 3. tipa može trajati samo 24 tjedna.

Nakon što je brzi test na hepatitis C dao pozitivan rezultat, radi se PCR analiza kojom se otkriva RNA ovog virusa u uzorcima krvi.

PCR dijagnostika

Lančana reakcija polimerazom (PCR) je eksperimentalna tehnika za otkrivanje virusa. Takva analiza za hepatitis C omogućuje značajno povećanje koncentracije određenih fragmenata DNA ili RNA virusa u dostavljenim uzorcima. To omogućuje njihovo prepoznavanje, pa čak i brojanje.

Ovaj test za hepatitis C provodi se prema sljedećoj metodi:

1. Uzorak krvi (genetski materijal), koji može sadržavati željeni gen za hepatitis, unosi se u epruvetu. Na njega se stavljaju posebne tvari - primeri, to su kratki segmenti željenog gena, koji se sintetiziraju kemijski. DNA ili RNA polimeraza je također dodana u ovu posudu, ona je u stanju izgraditi lance nukleinskih kiselina koji su potpuno identični originalu. Dobivenom sastavu dodaje se izbor slobodnih nukleotida, koji su posebni gradevinski materijal za DNA i RNA, a jedan od njih sadrži najsitnije čestice radioaktivnog fosfora.
2. Dobivena smjesa najprije se zagrije na 95 stupnjeva, pri čemu se oba lanca DNK, isprepletena u normalnom stanju, odmotaju uslijed takvog udara.
3. Za nastavak analize, pripravak se ohladi, u ovom trenutku početnice se pričvršćuju na željeni dio genoma virusa hepatitisa, sprječavajući formiranje DNA u dvostruku spiralu. Kada se smjesa ohladi, polimeraza traži točno pojedinačne lance nukleotida. Tijekom pričvršćivanja ovog enzima, on klizi duž lanca DNK (poput bloka na užetu), a na dvostrukoj spirali ne može "raditi", za to se smjesa zagrijava.
4. Za proširenje analize provodi se ponovno zagrijavanje, što opet dovodi do odvajanja nukleotidnih lanaca. Prilikom izvođenja ovakvih PCR ciklusa u uzorku se broj željenih gena za hepatitis povećava u geometrijskim razmjerima, a ostatak genetskog materijala proizvodi se (formira) samo linearno.
5. Za dovršetak studije, otopina se pročišćava od zaostalih čestica nukleotida. Razdvajaju se elektroforezom, uz odvajanje prema parametrima molekulske mase lanaca DNA. Takvi testovi za hepatitis C pomoću PCR-a omogućuju određivanje jesu li željeni geni virusa prisutni u ispitivanom uzorku ili ne.

Prednost ovog testa je vrlo visok prag osjetljivosti PCR reakcije. U idealnom slučaju, takva dijagnostička tehnika zahtijeva samo jedan genom virusa za cijeli uzorak.

Osim toga, takav PCR je potpuno specifičan. Svaki od gena ima jedinstvenu sekvencu nukleotida, koja se, poput otiska prsta, ne može nigdje ponoviti. Za ovu analizu hepatitisa C, početnice su sintetizirane na takav način da apsolutno odgovaraju jedinstvenim regijama gena od interesa koje nema niti jedna druga sekvenca.

Ova tehnika također vam omogućuje analizu za hepatitis B C i njihovo određivanje, pomažući u uspostavljanju konačne dijagnoze.

Takav laboratorijske analize omogućuje vam da dobijete više informacija od puke prisutnosti ili odsutnosti RNA ili druge vrste virusa hepatitisa C u uzorcima krvi. Određivanjem parametra radioaktivnog zračenja također je moguće odrediti koliko je željenog genetskog materijala izvorno bilo u uzorku koji se proučava. To vam omogućuje određivanje parametra takozvanog virusnog opterećenja - koncentracije čestica RNK hepatitisa u određenom volumenu.

Kvalitativna PCR analiza

Ova analiza omogućuje određivanje prisutnosti virusa hepatitisa u uzorcima krvi. Trebalo bi ga provesti za sve osobe kod kojih su otkrivena antitijela na hepatitis.

Kao rezultat takve studije mogu postojati samo dvije vrijednosti:

• "Otkriveno". Ovako pozitivan rezultat testa tumači se na sljedeći način: u analiziranom uzorku iz biološkog materijala pronađeni su fragmenti RNK virusa hepatitisa. Iz ovoga proizlazi da je postojala činjenica infekcije pacijenta ovim virusom. To može značiti da se uzročnik hepatitisa razmnožava u tijelu i inficira nove stanice, uništavajući jetru.
• "Nije otkriven". Ovaj rezultat ukazuje da u uzorku koji je analiziran u ovom laboratoriju nisu pronađeni fragmenti RNA koji su specifični za virus hepatitisa C. Također je moguće da je koncentracija RNA uzročnika virusa u ispitivanom uzorku bila toliko niska da je test mogao ne otkriti ga. U takvim slučajevima se kaže da je razina koncentracije ispod praga osjetljivosti testa.

Takav test također može biti lažno pozitivan ili lažno negativan, zbog kontaminacije biomaterijala ili prisutnosti u uzorcima specifičnih tvari koje reagiraju s kemijskim komponentama potrebnim za analizu.

Treba naglasiti da u akutnim fazama hepatitisa C, kvalitativna studija pomoću PCR metode može otkriti njegovu RNA već nakon 1-2 tjedna od trenutka infekcije tijela. To znači da je moguće otkriti bolest mnogo prije manifestacije njegovih vanjskih simptoma ili pojave antitijela na hepatitis u tijelu.

Vađenje krvi (iz vene) po mogućnosti se provodi natašte.

Kvantitativna PCR analiza

Uz pomoć ove analize određuje se razina koncentracije virusa hepatitisa u bolesnika (virusno opterećenje). Takav test potrebno je položiti kako bi se procijenila količina RNK virusa u jedinici određenog volumena.

Dešifriranje testova za hepatitis C, provedeno prema ovoj metodi, može dati sljedeće rezultate:

Kvantitativna PCR analiza provedena u različitim razdobljima antivirusne terapije (1., 4., 12. i 24. tjedan) omogućuje procjenu učinkovitosti liječenja i potrebne prilagodbe.

Specifičnosti analize

Ovaj test se mora poduzeti kako bi se odredili različiti genotipovi hepatitisa C. Trenutno je poznato 11 genotipova ovog patogena i mnogi podtipovi. Kod nas su česti genotipovi hepatitisa C 1., 2. i 3. tipa. U laboratorijima se mogu otkriti različiti podtipovi ovih vrsta: 1a, 1c, 2a, 2c ili 3, 4, 5, 6 genotipovi s različitim modifikacijama podtipova. Za sve ove hepatitise specifičnost određivanja je 100%.

Pojašnjenje modifikacije genotipa omogućuje odabir odgovarajućeg liječenja. Prisutnost određenih tipova genotipa kod pacijenta ne znači da je bolest lakša ili teža, to su samo varijante virusa hepatitisa, i ništa više.

U slučajevima kada laboratorij ne može izolirati genotip virusa, može se izdati rezultat: „Nije tipiziran. Istraživali su se genotipovi: takvi i onakvi” (na primjer, 1a, 2c, 3av). Ovaj prijepis pokazuje da u ovom laboratoriju nije bilo odgovarajućih reagensa koji bi mogli odrediti genotip virusa hepatitisa. Tijekom istraživanja izvršena je provjera virusa navedenih na popisu, ali nije utvrđena njihova korespondencija s uzorcima RNK.

Za postavljanje konačne dijagnoze nije dovoljna samo jedna vrsta analize. Svaki od testova može dati lažno pozitivan rezultat. Kako bi se točno odredio tip hepatitisa i stupanj oštećenja tijela ovom infekcijom, provodi se sveobuhvatna studija. U tom slučaju se radi biopsija jetre i ispituju njeni enzimi: ALT, AST, kao i alkalna fosfataza i LDH. Također se može provesti test bilirubina i analiza protrombinskog indeksa.

Samo skup takvih testova i laboratorijskih studija, sa opća analiza stanje pacijenta pomoći će odrediti prisutnost hepatitisa u tijelu, njegov oblik, kao i težinu. Na temelju njih liječnik može odrediti daljnje liječenje i dati moguću prognozu za bolesnika.

To je virus koji sadrži molekulu RNK. Sposoban je izbjeći imunološki odgovor tijela zbog svoje velike sposobnosti mutiranja. Postoji šest glavnih genotipova virusa i mnogo podtipova. U našim krajevima uglavnom su rasprostranjeni genotipovi 1, 2 i 3.

U 75-80% slučajeva bolest postaje kronična, što uzrokuje stanje u kojem se tkivo jetre zamjenjuje vezivnim tkivom. Fibroza pak dovodi do raka ili ciroze. Glavni put prijenosa bolesti je putem krvi. Ako osoba ispunjava uvjete za testiranje na hepatitis C, imat će dva glavna testa. Određuju se antitijela na virus, au nedostatku se smatra da nema hepatitis. Ako se u krvi otkrije prisutnost protutijela na virus hepatitisa, provodi se PCR analiza.

RNK se ovom metodom određuje u krvi već 10-12 dana nakon infekcije i ukazuje da se virus aktivno umnožava u tijelu. U tom razdoblju jednostavno je nemoguće otkriti virus na bilo koji drugi način, jer još ne proizvodi specifična antitijela, a oštećenje jetre još uvijek nije vidljivo u biokemijskim pretragama i biopsijama.

Vrste PCR studija

PCR analiza ima određene prednosti:

1. U takvoj studiji provodi se definicija samog virusa, a ne proizvoda njegove vitalne aktivnosti. U ovom slučaju moguće je odrediti vrstu patogena.
2. Tehnika ima visoku specifičnost zbog činjenice da se ispituje samo određeni dio DNK, smanjena je vjerojatnost dobivanja pogrešnih rezultata.
3. Ima vrlo visoku osjetljivost, čak se određuje i minimalna količina virusa u krvi.

Postoje dvije glavne metode za testiranje krvi na hepatitis C pomoću PCR-a: kvalitativna i kvantitativna PCR analiza. Koristi se kvalitativna metoda za utvrđivanje prisutnosti virusa. Svi oni koji imaju antitijela na hepatitis u krvi prolaze takvu analizu. Rezultat može biti samo dvije vrste: "pronađen" i "nije pronađen", zadnja vrijednost smatra normom.

Pozitivan rezultat testa znači da su u uzorku pronađeni RNA fragmenti virusa, što pak ukazuje da je osoba bila zaražena hepatitisom. U slučaju negativnog nalaza moguće su dvije mogućnosti: infekcije nije bilo ili je njezina koncentracija toliko niska da se ovom metodom ne otkriva.

Kvantitativna metoda razlikuje se u biti studije, u svojim ciljevima i indikacijama. Nisu svi pacijenti s hepatitisom podvrgnuti takvoj analizi. On, kao i svaki drugi, ima određene ciljeve. Koristi se određivanje količine virusa ili kvantitativna analiza PCR-a na RNA virusa:

• odrediti RNA virusa u krvi i postaviti dijagnozu "virusni hepatitis";
• predvidjeti kroničnost hepatitisa i tijek bolesti;
• pratiti antivirusno liječenje i donositi odluke o produljenju, smanjenju ili promjeni taktike liječenja.

Studija se provodi u prisutnosti takvih indikacija:

• hepatitis C otkriven je tijekom kvalitativne studije i antitijela su pronađena u krvi;
• s mješovitim hepatitisom;
• ako se planira antivirusna terapija;
• tijekom i nakon liječenja hepatitisa C;
• u prisutnosti kroničnog i akutnog hepatitisa C.

Test se provodi za procjenu broja virusnih jedinica u određenom volumenu uzorka krvi od 1 cm³ ili 1 ml. Rezultati su dati u brojkama. Korišteni pokazatelji su: IU / ml, što znači međunarodna jedinica po mililitru i kopije po ml, broj kopija RNK u 1 ml uzorka. Što je veći kvantitativni pokazatelj analize, to je veća vjerojatnost prijenosa virusa na drugu osobu.

R-DNA - metoda razgranate DNA. Jednostavniji i jeftiniji način. Koristi se za veći broj uzoraka, ima nisku osjetljivost, od 500 IU / ml. Uz ovu osjetljivost, postoji mogućnost da virus neće biti otkriven, čak i ako je prisutan u krvi.

TMA - metoda transkripcijske amplifikacije. Ova tehnika otkriva nukleinske kiseline u krvi. Ima nisku cijenu i istodobno visoku osjetljivost, od 5–10 IU / ml. Relativno nova tehnika koja vam omogućuje ubrzanje i smanjenje troškova procesa testiranja.

Rezultati kvantitativne analize određivanja RNK virusa, koje je prezentirao laboratorij, dešifriraju se na sljedeći način:

Brojčana vrijednost količine virusa, IU / ml	Dešifriranje rezultata
Nije otkriven	Norma za zdravi ljudi. Vrijednost virusa je ispod granice osjetljivosti metode ili ga uopće nema.
Do 1,8*10^2	Koncentracija je ispod linearnog raspona.
Do 8*10^5	Virus je pronađen u krvi. Virusno opterećenje je malo.
Preko 8*10^5
Preko 2,4*10^7	Otkriven virus. Viremija je visoka, iznad linearnog raspona.

Rezultati kvantitativne analize mogu se dostaviti u jedinicama IU / ml i u kopijama po ml. Istodobno, faktor pretvorbe obično se razlikuje za različite laboratorije i metode. Njegove vrijednosti se kreću od jedan do pet, općenito je prihvaćeno da je u prosjeku 1 IU 4 kopije po ml.

Primjenjivost testiranja viremije u različitim fazama

Analiza se koristi za otkrivanje aktivne infekcije u tijelu. Prema njegovom rezultatu može se prosuditi kolika je vjerojatnost prijenosa virusa. To je važno, na primjer, tijekom trudnoće, kada pričamo o mogućnosti infekcije djeteta od majke s hepatitisom.

Analiza se provodi tek nakon otkrivanja prisutnosti antitijela na virus u krvi. Neophodno je jer se do 25% ljudi koji su preboljeli akutni oblik hepatitisa sami oporave, a u laboratorijskim nalazima nemaju virus. Rezultati se koriste za procjenu učinkovitosti tretmana i prije njega.

PCR dijagnostika se provodi prije liječenja kako bi se naknadno utvrdila njegova učinkovitost. Vjerojatnost povoljnog ishoda liječenja obrnuto je proporcionalna ovom parametru. Što je veći, to je lošija prognoza.

Tijekom liječenja analiza se provodi nakon 1, 4, 12, 24 tjedna. Liječenjem se postiže potpuni virološki odgovor, pod uvjetom da se takvom analizom ne odredi virusno opterećenje.

Ako se 12 tjedana nakon početka terapije pokazatelj ne smanji za dvije logaritamske jedinice, tada najvjerojatnije ova terapija neće pomoći u ovom konkretnom slučaju.

U analizama se pad virusnog opterećenja po logaritamskoj jedinici izražava smanjenjem broja nula u rezultatu za jedan. Na primjer, s 1.000.000 IU trebao bi se smanjiti na 100.000 IU.

Nakon liječenja utvrđuje se otkriti recidiva. Dakle, odstupanje ovog parametra od norme ukazuje na to da količina virusa u tijelu raste i stoga se bolest vraća.

Neki pokazatelji mogu utjecati na rezultat. Prije svega, to je moguća pogreška laboratorija, kršenje pravila za provođenje istraživanja, standarda za čuvanje i pripremu uzoraka, kao i:

• kontaminacija uzorka biomaterijala;
• prisutnost zaostalih tragova heparina u krvi;
• prisutnost u krvi inhibitora - tvari koje su kemijski spojevi ili proteini koji utječu na komponente PCR-a.

Rezultati studije također se mogu razlikovati za različite laboratorije, što je zbog upotrebe različitih reagensa i drugih razloga. Ova pojava je apsolutno normalna. Stoga, za ispravnu procjenu učinkovitosti liječenja, vrijedi analizirati u istom laboratoriju.

Važne napomene o metodologiji istraživanja:

• Razina virusnog opterećenja ne može se koristiti za procjenu stupnja oštećenja jetre ili ozbiljnosti tijeka samog hepatitisa. Za procjenu ovih pokazatelja potrebno je provesti dodatne studije, kao što su biokemijski test krvi, biopsija, elastometrija i drugi.
• Pri planiranju i antivirusnoj terapiji, osim pokazatelja viremije, važno je odrediti i genotip virusa.