ev internet

Kalitatif RNA'lı hepatit virüsü tespit edilmedi. PCR çalışması ile hepatit C teşhisi

Hepatit C, enfekte bir kişinin kanıyla temas yoluyla HCV virüsü (hepatit C) ile enfeksiyon sonucu oluşan karaciğer hücrelerinin iltihaplanmasıdır. HCV flavivirüsünün genetik kodu, virüsün yapısında bulunan RNA (ribonükleik asit) molekülü tarafından taşınır. Bu yaşamı tehdit eden fenomen, gizliliği patolojinin ilk aşamasında ayırt eder. Enfeksiyon ile semptomların başlangıcı arasındaki zaman aralığı (yanıt bağışıklık sistemi) bir aydan altı aya kadar değişebilir. Kural olarak, hastalık kronik bir form alır ve tedavisi zordur.

Modern tıp, patolojiyi küçük karaciğer hasarı ile teşhis etmeyi mümkün kılar. en yaygın ve etkili yöntemler tanı, PCR analizini içerir. Bu yazıda ne olduğunu ve çeşitlerinin neler olduğunu düşünelim.

araştırma nedir

Hepatit C için PCR analizi, ribonükleik asit virüsünün (RNA) genetik materyali olan flavirüsü tespit eden bir laboratuvar testidir. Kandaki RNA moleküllerinin sayısını, biyolojik materyalin kalitesini, HCV flavirus'ün genetik tipini belirler.

Hepatit C için PCR yöntemi, kural olarak, enfeksiyondan kısa bir süre sonra antikor oluşumundan önce bile minimum flavirüs miktarının tespit edilmesini sağlar.

Flavavirüste bulunan 30-60 nm boyutundaki ribonükleik asit parçacıklarını tespit ettiği için bu çalışma genellikle RNA analizi olarak anılır.

Çalışma şu şekilde gerçekleştirilir: hasta aç karnına bir damardan kan bağışlar ve daha sonra çeşitli yöntemlerle test edilir:

Real-Time PCR, kapalı, otomatik bir şekilde gerçekleştirilir ve RNA virüsü için 15 IU/mL'lik bir alt saptama sınırına sahiptir;
50-100 IU/ml hassasiyete sahip COBAS AMPLICOR.

Teşhis tekniğinin duyarlılık eşiği ne kadar yüksekse, incelenen biyolojik materyalde virüsün en düşük içeriğini saptama olasılığı o kadar yüksektir.

Ne tür analizler kullanılır

Oldukça basit ve hızlı bir şekilde tespit edilirken, onlarca yıldır başarıyla kullanılan bir analize PCR hepatiti denir. Tıpta, reaksiyonu gerçekleştirmek için temelde birbirinden farklı iki yöntem vardır:

kalitatif bir yöntem, belirli bir virüsün genetik kaynağının biyolojik materyalindeki varlığını ortaya çıkarır;
kantitatif analiz, patolojinin evresini belirlemeye veya devam eden terapötik kursun etkinliğini değerlendirmeye izin veren genetik maddenin miktarını ölçer;
Genotiplendirme, vücutta bulunan virüsün türünü belirler.

Genel olarak, bir kan testi, vireminin doğasını ve patojenin genetik tipini belirlemeye yardımcı olur. Kural olarak, çalışma, teşhis sisteminin hassasiyet derecesine bağlı olarak 1 kez gerçekleştirilir. Gerekirse, aşırı duyarlı bir reaktif kullanarak tekrar test edin.

kalitatif PCR

Hepatit C için kalitatif PCR RNA nedir? Reaksiyonun özü, hepatit RNA dizisinin varlığında yatmaktadır ve reaksiyon, yalnızca ELISA'da benzer bir etimolojiye sahip viral proteinlerin varlığında mümkündür. Karşılaştırma sürecinde karaciğer bölgesine yük ve olası hasarlar ortaya çıkar.

Bu yöntemin ayırt edici bir özelliği, tek bir genin varlığını bile tespit etme yeteneğidir.

PCR ve ELISA çalışmasının sonuçlarını aldıktan sonra, nihai enzim immunoassay sonucunun ne olduğuna bakılmaksızın hastanın uygun tedaviye ihtiyacı olduğu belirtilmelidir. Pozitif, enfeksiyonu gösterir ve PCR negatif, duyarlılık düzeyine göre azalmış sayıda viral partikülü gösterir.

Negatif bir PCR ve ELISA'nın alınmasını etkileyen birkaç koşul vardır:

materyalin toplanması için uygun koşulların olmaması;
ortaya çıkan analiz kontaminasyon içerir;
hastaya heparin enjeksiyonlarının erken uygulanması durumunda.

Hastanın PCR analizi için kan alırken belirli kurallara uyması gerekmez, bu durumda bu analizin kalitesi işlemi yapan sağlık çalışanına bağlıdır. Hastalığın varlığını belirleme yeteneği (özellikle akut formda), enfeksiyondan birkaç hafta sonra ortaya çıkar.

Kantitatif Analiz

Viral yükü tespit etmek için daha ileri tedavi ve vücudun tepkisinden hemen önce nicel bir test önerilir. Kan alma işlemi, yüksek kaliteli PCR ve ELISA ile aynı şekilde gerçekleştirilir, tek koşul hastanın işlemden önce sigara içemeyecek olmasıdır.

Çalışma sonucunda elde edilen verilerin özelliklerine gelince, artan yük, 800.000 IU / ml, düşük - 400.000 IU / ml'lik göstergelerle karakterize edilir. Virüsün hastanın vücudunda varlığı, negatif olmayan bir kalitatif test olan hepatit için PCR ile belirtilir.

Bu tür bir çalışma, hastanın etrafındaki insanlar için ne kadar tehlikeli olduğunu belirlemeyi mümkün kılar. Bu nedenle, örneğin, yüksek bir seviyenin tespiti, hastanın bulaşıcılığının arttığını gösterir. Ek olarak, analiz sonuçları en etkili tedavinin belirlenmesine ve mevcut tedavinin ne kadar etkili olduğunun belirlenmesine yardımcı olur.

Hızlı bir negatif test yanıtı, seçilen tekniğin başarısını gösterir ve yavaş bir yanıt, ayarlama ihtiyacını ve çok yönlü tedavinin kullanımını gösterir.

Analizi alma prosedürünü gerçekleştirme süreci, hastalığın seyrinin belirli gününe bağlıdır. İlk belirleme, hastanın hastaneye kabulünden sonraki ilk gün yapılır, daha sonra ilaca başlandıktan 4, 12 ve 24 hafta sonra işlem tekrarlanır.

Böylece kantitatif analiz, hangi tedavinin en etkili olduğunu, mevcut tedavinin süresini ve hastanın diğer insanlara göre riskini gösterir.

genotipleme

Analiz materyalini incelerken, meydana gelen virüs genotipinin doğruluğunu belirlemek önemlidir. Şu anda, sırayla belirli alt türleri içeren 11 hepatit C virüsü çeşidi vardır.

Bu türlerin tümü farklı tedavilere farklı tepki verirken, bazı çeşitler birçok ilaca tamamen dirençlidir.

Genotip, karaciğerin durumunu belirlemeyi ve göstermeyi mümkün kılar. Sonuçların “yazılmamış” olarak kaydedilmesi nadir değildir, bu da hastanın kanındaki virüsün bu test sistemi tarafından tespit edilmediği anlamına gelir. Bu, belirli bir genotip belirli bir bölgeye karşılık gelmiyorsa tespit edilebilir. Böyle bir durumda, malzemeyi incelemek için daha hassas bir sistem kullanılırken, analizin örneklenmesi tekrar yapılır.

aşırı duyarlı yöntem

Bazı durumlarda, hepatit teşhisinin diğer yöntemlerle gerçekleştirilemediği durumlarda, testin ne zaman yapılacağı ilgili doktor tarafından belirlenirken, aşırı duyarlı bir yöntem gereklidir:

Gizli tipte hastalığı olan hastalarda hepatit C virüsünün varlığından şüpheleniliyorsa;
hepatit C virüsüne karşı antikorların varlığı, PCR teşhisi ile doğrulanmadı;
seçilen tedavi yönteminin etkinliğinin kalitesini belirlemek ve hastalığı ortadan kaldırma gerçeğini doğrulamak için.

Bu yöntemin duyarlılığı, genellikle kullanılanlardan çok daha yüksektir, ancak bu yöntem hem olumlu hem de olumsuz yanlış sonuçları dışlamaz. Böyle bir durumda, prosedürün kalitesini ve malzemenin kendisinin kirlenme olasılığını kontrol etmek önemlidir.

PCR analizinin şifresini çözme

Analizin kodunun çözülmesi, sunulan materyaller temelinde yapılırken, laboratuvar çalışmalarının sonuçları yukarıda açıklanan belirli verileri içerir.

Şifre çözme, tahlilde pozitif bir PCR polimeraz zincir reaksiyonunun tanımlanmasını ve olumsuz değer ELISA, hastanın kanında hepatit C belirtisi olmadığı, ancak geçmişte bu hastalığın akut bir formundan muzdarip olduğu anlamına gelir. Kural olarak, teşhis sırasında uzmanlar PCR testlerinin göstergelerini kullanmaya başvururlar.

Yukarıdakilerin tümünü özetleyerek, bir analiz yaparken, elde edilen sonuçların mümkün olduğunca doğru olması için tüm kurallara ve önerilere uymanın önemli olduğu ve elde edilen verilere dayanarak, tespit etmenin mümkün olduğu sonucuna varabiliriz. kullanılan terapinin etkinliği ve tam iyileşme için daha fazla şans.

Herkes yöntemin ne için kullanıldığını bilmiyor PCR teşhisi hepatit C için. Yaygın hastalık gruplarından biri, gastrointestinal sistemin bulaşıcı hastalıklarıdır. Çoğu zaman mide (ülserler), bağırsaklar (kolit, enterit) ve karaciğer (hepatit) acı çeker.

Yukarıdaki tüm organlar arasında karaciğer en büyük yükü taşır. Karaciğerin vücuttaki rolü son derece önemlidir:

Hemen hemen tüm metabolik reaksiyonlar karaciğerde gerçekleşir (burada vücudun tam olarak çalışmasına izin veren her türlü hayati bileşen oluşur).
Karaciğer detoks yapan ana organdır. Yardımı ile (özellikle safra yoluyla), zehirlenmeye neden olabilecek ve ciddi sonuçlara yol açabilecek birçok substrat çıkarılır.

Ne yazık ki, birçok insan sağlığına dikkat etmiyor, bu yüzden karaciğer acı çekmeye başlıyor. Çeşitli etiyolojilerin (viral, toksik) hepatiti genellikle gelişir.

hepatit tanımı

karaciğer hastalıkları arasında önemli bir yer tutar. Hastalığın seyrinin ciddiyeti, tedavinin karmaşıklığı, onları bu organın farklı bir doğasının patolojisi arasında ilk sıraya koydu.

Tüm hepatitler akut ve kronik olarak ayrılır. Hepatit A ve B akut olarak sınıflandırılır.Hepatit C kronik olanlar arasında ilk sırada yer alır.

Bu hastalığa hepatit C virüsü neden olur. Karakteristik özellik hastalık bu mu uzun zamandır herhangi bir klinik belirti olmaksızın ortaya çıkabilir.

Esas olarak kan yoluyla bulaşır. Kan dolaşımı ile virüs karaciğere taşınır ve burada hücrelerinde çoğalmaya başlar. Virionların birikmesinin bir sonucu olarak, enfekte hepatosit yok edilir. Buna yanıt olarak, hepatosit kalıntılarına saldırmaya başlayan antikorlar üretilmeye başlar. Bu nedenle, zamanla, hastalığın seyrini ağırlaştıran karaciğer hücrelerine karşı bir havuz birikir.

Hastalığın oligosemptomatik veya asemptomatik olması ve klinik belirtilerin sadece önemli hücre hasarı ile ortaya çıkması nedeniyle, bu hastalık varlığını tespit etmek ve uygun önlemleri almak için tanı yöntemlerinin geliştirilmesini gerektirir.

Hepatit C teşhisi: kalitatif ve kantitatif testler

Günümüzde karaciğer biyopsisi, immünogram gibi yöntemler kullanılmaktadır.

Etkilenen hepatositlerin (karaciğer biyopsisinin incelenmesi) veya etkilenen hücrelere karşı spesifik antikorların (immünogram) varlığını doğrudan belirlemenize izin verirler. Bununla birlikte, virüsün kendisinin varlığını güvenilir bir şekilde belirlemenizi sağlayan bir yöntem vardır. Bu PCR - polimeraz zincir reaksiyonudur.

Bu yöntemin özü, belirli koşullar altında RNA zincirlerinin üretilmesi gerçeğinde yatmaktadır. Bunun nedeni, kanda veya incelenen biyopside viral partikül parçalarının bulunmasıdır. Ortamdaki bazı moleküller ile birleştiklerinde viral RNA'yı tamamlayıcı zincirlerin sentezi gerçekleşir. Daha sonra analiz edilip hepatit C virüsünün bilinen nükleotid dizisi ile karşılaştırıldığında, bu virüsün vücutta bulunup bulunmadığını ve karaciğer hasarının olup olmadığını belirlemek mümkündür.

PCR, kanda hepatit virüsüne karşı spesifik antikorların saptanmasından sonra gerçekleştirilir. Testten sonra bir sonuç verilir - RNA "tespit edildi" veya "tespit edilmedi". Bazen “yeterli malzeme yok” diyebilir - bu durumda hepatit C için ikinci bir analiz gereklidir.

Viral partiküllerin sayısı gerekli minimum sayıdan azsa, o zaman hepatit olmadığını ve genetik materyalin veya bazı nükleotid dizilerinin taklit edilmesi nedeniyle minimum miktarda genetik materyalin “karıştırılabileceğini” söyleyebiliriz. yanlışlıkla virüsünkiyle çakışıyor.

PCR ile olumsuz sonuç kanda gerçekten viral partiküller olduğunda gözlemlenebilir, ancak bunlar o kadar azdır (enfeksiyon yakın zamanda meydana geldi veya analizden önce uzun ve yoğun antiviral tedavi uygulandı), test sistemi konsantrasyonlarını normal olarak belirleyemedi. RNA - "bulunamadı."
PCR'nin pozitif bir sonucu varsa, kanda o kadar çok viral partikül vardır ki sayıları test sisteminin alt duyarlılık eşiğini aşmaktadır. Bu durumda, bulaşıcı bir süreç geliştirme riski yüksektir (veya zaten oldukça ileri bir aşamada mevcuttur). Genellikle, yüksek miktarda virüs zaten tedavi ve ardından karaciğer nakli için bir göstergedir.

Bazen test yanlış pozitif veya yanlış negatif olabilir.

Yanlış negatif sonuç hepatit PCR viral partikülün kopyalarının oluşumunu engelleyen reaksiyon ortamında belirli bileşenler mevcut olduğunda gözlemlenir. Bu nedenle, virüsün geçişine ve hastalığın ilerlemesine katkıda bulunan kanın durumunun gerçek bir resmini elde etmek mümkün değildir. Kanda heparinin varlığı da reaksiyonu etkileyebilir (kanın nispi viskozitesindeki azalma nedeniyle). Test materyalinin taşınması ve saklanması için koşullar karşılanmadığında da analizin yanlış yorumlanması mümkündür.

Hepatit C teşhisi konduğunda yanlış pozitif sonuçlar, PCR çoğunlukla test tüpü veya çalışma ortamı kontamine olduğunda verir. Ayrıca diğer grupların hepatit virüslerinin varlığında (çapraz reaksiyona bağlı olarak) pozitif sonuçlar gözlemlenebilir.

Hepatit C tespiti için kalitatif PCR analizi

Kandaki varlığı Büyük bir sayı kriyoglobulinler ayrıca PCR'nin davranışını doğrudan etkiler. Bu nedenle, C'yi gerçekleştirmeden önce, sonucun bozulmasını önceden belirlemek ve önlemek için kandaki konsantrasyonlarını belirlemek zorunludur.

Bu testler yapıldıktan sonra kanda viral partiküllerin olup olmadığı anlaşılır. Bunları belirlerken, sürecin ilerlemesini yavaşlatmak için hemen antiviral tedaviye başlanması önerilir. Hepatit B'den farklı olarak, hepatit C için tam bir tedavi yoktur; hastalık sadece gizli bir aşamaya geçer ve daha yavaş ilerlemeye başlar. Karaciğer hasarı kaçınılmazdır. Sürecin son aşamasında, karaciğer artık işleviyle baş edemez hale geldiğinde nakledilmesi gerekebilir.

Tedavi esas olarak iki ilaçla gerçekleştirilir - interferon ve ribavirin.

Hepatosit hasarı sürecini yavaşlatmadaki etkinlikleri kanıtlanmıştır. Yol boyunca, karaciğerin çalışmasını kolaylaştırmak için infüzyon tedavisi mutlaka reçete edilir.

Kandaki viral partiküllerin sayısında bir artış yaşayan tüm hastalar bir hepatolog ile kaydedilmelidir. Yılda birkaç kez, sürecin ilerlemesini belirlemek ve transplantasyon endikasyonlarını zamanında belirlemek için önleyici muayeneden geçmeleri önerilir. Ek olarak, doktorların görüşleri biraz farklı olsa da, hepatoprotektörler de kullanılabilir. Bazıları bu ilaçların süreci durdurmanıza ve henüz etkilenmemiş hepatositleri korumanıza izin verdiğine inanıyor; diğerleri, onları almanın bir anlamı olmadığına ve yoğun antiviral tedavinin yapılması gerektiğine inanıyor.

Bu nedenle, hepatit C, tanımlanması biraz zor olan hastalık kategorisine aittir. Tanı yöntemlerinin iyileştirilmesi ve zamanında önleyici muayeneler bu hastalığın görülme sıklığını azaltacaktır. Bu hastalığın önlenmesi de önemlidir. Kanla temastan dikkatlice kaçınmak, ilaç almayı reddetmek gerekir, ancak o zaman bu hastalık ortadan kaldırılacaktır. Önleme ve tedavideki ana şey, hastanın sağlığına bilinçli tutumudur.

Hepatit C'de RNA testi, hastalığın seyrini belirlemede en önemli ve doğru yöntemdir. Bu çalışma, gerekli tedavi yöntemini belirlemenizi sağlar. Hastalığı teşhis etmek için yaygın olarak birkaç kan testi kullanılır:

hepatit C belirteçleri - hastalığın varlığının ilk şüphesinde kullanılır;
Hepatit C virüsünün RNA çalışması.

Viral hepatit

Viral hepatit C, karaciğeri etkileyen bulaşıcı bir hastalıktır. Ana enfeksiyon yolu, enfekte olmuş kanın yutulmasıdır. Bu, steril olmayan tıbbi aletler nedeniyle kan nakli sırasında olabilir. Bazen hastalık korunmasız cinsel ilişki yoluyla veya doğum sırasında enfekte bir anneden çocuğuna bulaşır.

Hastalık kronik formu için tehlikelidir. Bir ömür boyu sürebilir ve ciddi karaciğer fonksiyon bozukluğu, siroz veya kansere neden olabilir. Enfekte kişilerin yaklaşık %80'i hastalığın kronik bir formuna sahiptir.

Hastalığın ana tehlikesi, belirgin semptomlar olmaksızın hastalığın gizli formunda yatmaktadır. Bazen ateş yükselir, mide bulantısı ve kusma meydana gelir, fiziksel halsizlik, yorgunluk artar, iştah ve kilo kaybı olur. Bu hastalıktaki karaciğer dokusu, hücrelerinin kötü huylu bir şekilde dejenere olduğu bir sonucu olarak hafif bir sıkıştırma ile karakterize edilir. Hastalığın gelişimi çok yavaştır ve birkaç on yıl sürebilir.

RNA tanımı

Hepatit C RNA nedir ve neden test edilmelidir? Herhangi bir virüs, RNA'nın en küçük parçacığıdır. Virüsün RNA'sının belirlenmesi, esasen hepatit C virüsünün genetik materyalinin vücutta varlığını belirlemek için kan hücrelerinin biyolojik bir çalışmasıdır.Bunun için polimeraz zincir reaksiyonu yöntemi kullanılır. Hepatit C virüsü RNA'sını belirlemek için 2 tip test vardır.

Niteliksel bir test, hücrelerde bir virüsün varlığını belirler. kan dolaşım sistemi. Pozitif bir test, virüsün kanda aktif olarak çoğaldığını ve sağlıklı karaciğer hücrelerini enfekte ettiğini gösterir. Antiviral tedavi, 4, 12 ve 24 haftalık tedavi süresince bu testi geçmeyi içerir. Tedaviyi durdurduktan sonra, analiz ayrıca 24 hafta sonra ve daha sonra yılda 1 kez yapılır.

Kandaki hepatit C virüsünün konsantrasyonunu (spesifik içeriği) belirlemek için nicel bir test yapılır. Yani belli bir miktar kandaki viral RNA miktarı belirlenir. Hastalığın şiddeti virüsün miktarına bağlı değildir. Bu analiz, hastalığın bulaşıcı derecesini belirlemek için yapılır. Tedavinin başarısını ve antiviral tedavinin süresini belirler ve başlamadan önce ve bitiminden 3 ay sonra gerçekleştirilir.

Bugüne kadar 10 tanesi bilinmektedir. Viral RNA genotiplemesi, varlığını teşhis etmeyi mümkün kılar. farklı şekiller hastalıklar. Virüsün genetik tipi, tedavinin zamanlamasını belirlemede belirleyicidir. Doğru seçilmiş tedavi, %90 tam iyileşme garantisi verebilir.

Hepatit C virüsü (HCV), Flaviviridae ailesinden bir RNA virüsüdür. Bu enfeksiyon, kan hücrelerinde (monositler, nötrofiller, B-lenfositler ve makrofajlar) çoğalabilir ve ayrıca karaciğer hücrelerini - hepatositleri enfekte edebilir. Sayesinde yüksek derece mutasyonel aktivite, bu tip hepatit insan bağışıklık sisteminin etkilerinden kaçınabilir.

Karaciğer hasarı derecesinde farklılık gösteren ve hepatit tedavisinin zamanlamasını etkileyen böyle bir virüsün 11 genotipi ve birçok alt tipi vardır. Hepatit C'nin bu çeşitliliği, farklı antiviral tedavi yöntemleri gerektirir. Örneğin, hepatit 1 ve 4 genotiplerinin 48 hafta tedavi edilmesi gerekir ve 2. ve 3. tip virüslere karşı bir tedavi süreci için sadece 24 hafta sürebilir.

Hepatit C için hızlı bir test pozitif sonuç verdikten sonra, kan örneklerinde bu virüsün RNA'sını tespit etmek için bir PCR analizi yapılır.

PCR teşhisi

Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR), virüsleri tespit etmek için deneysel bir tekniktir. Hepatit C için böyle bir analiz, gönderilen örneklerde virüsün belirli DNA veya RNA parçalarının konsantrasyonunu önemli ölçüde artırmanıza izin verir. Bu onları tanımayı ve hatta sayıyı saymayı mümkün kılar.

Hepatit C için bu test aşağıdaki yönteme göre yapılır:

İstenilen hepatit genini içerebilen bir kan örneği (genetik materyal), bir test tüpüne verilir. Üzerine özel maddeler yerleştirilir - primerler, istenen genin kimyasal olarak sentezlenen kısa uzunluklu bölümleridir. Bu kaba DNA veya RNA polimeraz da eklenir, orijinaliyle tamamen aynı olan nükleik asit zincirleri oluşturabilir. Ortaya çıkan bileşime, özel bir serbest nükleotid seçimi eklenir. Yapı malzemesi DNA ve RNA için ve bunlardan biri en küçük radyoaktif fosfor parçacıklarını içeriyor.
Ortaya çıkan karışım ilk önce 95 dereceye kadar ısıtılır, bunun sonucunda normal durumda iç içe geçmiş her iki DNA dizisi de böyle bir etki nedeniyle gevşer.
Analize devam etmek için preparasyon soğutulur, bu anda primerler hepatit virüsü genomunun istenen bölümüne eklenir ve DNA'nın çift sarmal şeklinde oluşmasını engeller. Karışım soğuduğunda, polimeraz tam olarak tek nükleotid zincirlerini arar. Bu enzimin bağlanması sırasında, DNA zinciri boyunca kayar (bir ip üzerindeki bir blok gibi) ve çift sarmal üzerinde “çalışamaz”, çünkü karışım ısıtılır.
Analizi genişletmek için, tekrar nükleotid zincirlerinin ayrılmasına yol açan yeniden ısıtma gerçekleştirilir. Numunede bu tür PCR döngüleri gerçekleştirilirken, istenen hepatit genlerinin sayısı geometrik oranlarda artar ve genetik materyallerin geri kalanı yalnızca doğrusal bir modelde üretilir (oluşturulur).
Çalışmayı tamamlamak için çözelti, artık nükleotid parçacıklarından saflaştırılır. DNA zincirlerinin moleküler ağırlık parametrelerine göre ayırma ile elektroforez ile ayrılırlar. PCR kullanan bu tür hepatit C testleri, test örneğinde istenen virüs genlerinin bulunup bulunmadığının belirlenmesini mümkün kılar.

Bu testin avantajı, PCR reaksiyonunun çok yüksek hassasiyet eşiğidir. İdeal olarak, böyle bir teşhis tekniği, tüm numune için yalnızca bir virüs genomu gerektirir.

Ek olarak, bu tür PCR tamamen spesifiktir. Genlerin her biri, parmak izi gibi hiçbir yerde tekrarlanamayan benzersiz bir nükleotit dizisine sahiptir. Bu hepatit C testi için, primerler, başka hiçbir dizinin sahip olmadığı ilgili genlerin benzersiz bölgeleriyle kesinlikle eşleşecek şekilde sentezlenir.

Bu teknik aynı zamanda hepatit B C için analiz yapmanızı ve bunları belirlemenizi sağlayarak nihai tanıyı koymanıza yardımcı olur.

Bu laboratuvar analizi, kan örneklerinde HCV RNA'nın veya başka bir RNA türünün varlığı veya yokluğundan daha fazla bilgi sağlar. Radyoaktif radyasyon parametresini belirleyerek, istenen genetik materyalin ne kadarının çalışılan numunede orijinal olduğunu belirlemek de mümkündür. Bu, sözde viral yükün parametresini belirlemenizi sağlar - belirli bir hacimdeki hepatit RNA parçacıklarının konsantrasyonu.

Kalitatif PCR analizi

Bu analiz, kan örneklerinde hepatit virüsünün varlığını belirlemenizi sağlar. Hepatit antikorlarına sahip olduğu tespit edilen tüm insanlar için yapılmalıdır.

Böyle bir çalışmanın sonucunda sadece iki değer olabilir:

"Keşfetti". Böyle bir pozitif test sonucu şu şekilde yorumlanır: biyolojik materyalden alınan analiz edilen numunede hepatit virüsü RNA parçaları bulundu. Bundan, hastanın bu virüsle enfekte olduğu gerçeği vardır. Bu, hepatit etkeninin vücutta çoğaldığını ve yeni hücrelere bulaşarak karaciğeri yok ettiğini gösterebilir.
"Algılanmadı". Bu sonuç, bu laboratuvarda analiz edilen numunede hepatit C virüsüne özgü hiçbir RNA fragmanının bulunmadığını gösterir.Test numunesindeki nedensel virüs RNA'sının konsantrasyonunun, testin gerçekleştirilemeyeceği kadar düşük olması da mümkündür. onu tespit et. Bu gibi durumlarda, konsantrasyon seviyesinin testin hassasiyet eşiğinin altında olduğu söylenir.

Böyle bir test, biyomateryalin kontaminasyonu veya numunelerde analiz için gerekli kimyasal bileşenlerle reaksiyona giren spesifik maddelerin mevcudiyeti nedeniyle yanlış pozitif veya yanlış negatif olabilir.

Hepatit C'nin akut evrelerinde, PCR yöntemini kullanan kalitatif bir çalışmanın, vücudun enfeksiyon anından 1-2 hafta sonra RNA'sını tespit edebileceği vurgulanmalıdır. Bu, hastalığı dış semptomlarının ortaya çıkmasından veya vücutta hepatit antikorlarının ortaya çıkmasından çok önce tespit etmenin mümkün olduğu anlamına gelir.

Kan örneklemesi (damardan) tercihen aç karnına yapılır.

Kantitatif PCR analizi

Bu analiz yardımıyla, bir hastadaki (viral yük) hepatit virüsünün konsantrasyon seviyesi belirlenir. Belirli bir hacimdeki bir birimdeki virüs RNA miktarını değerlendirmek için böyle bir testten geçilmelidir.

Bu yönteme göre gerçekleştirilen hepatit C için deşifre testleri aşağıdaki sonuçlara sahip olabilir:

Antiviral tedavinin farklı dönemlerinde (1., 4., 12. ve 24. haftalarda) yapılan kantitatif PCR analizi, tedavinin etkinliğini değerlendirmeyi ve gerekli ayarlamaları yapmayı mümkün kılar.

Analiz Özellikleri

Hepatit C'nin çeşitli genotiplerini belirlemek için bu test yapılmalıdır. Halihazırda bu patojenin 11 genotipi ve birçok alt tipi bilinmektedir. Ülkemizde 1., 2. ve 3. tip hepatit C genotipleri yaygındır. Laboratuvarlarda bu türlerin çeşitli alt tipleri tespit edilebilir: 1a, 1c, 2a, 2c veya çeşitli alt tip modifikasyonları ile 3, 4, 5, 6 genotip. Tüm bu hepatitler için, belirlemenin özgüllüğü %100'dür.

Genotip modifikasyonunun netleştirilmesi, uygun tedavinin seçilmesini mümkün kılar. Bir hastada belirli genotip türlerinin varlığı, hastalığın daha kolay veya daha zor olduğunu göstermez, bunlar sadece hepatit virüsünün çeşitleridir ve daha fazlası değildir.

Laboratuvarın virüsün genotipini izole edemediği durumlarda sonuç yazılabilir: “Yazılmamış. Genotipler araştırıldı: şöyle ve böyle” (örneğin, 1a, 2c, 3av). Bu transkript, bu laboratuvarda hepatit virüsünün genotipini belirleyebilecek uygun reaktifler olmadığını gösterir. Çalışma sırasında listede yer alan virüsler için kontrol yapılmış ancak RNA örnekleriyle olan yazışmaları tespit edilememiştir.

Kesin tanı koymak için tek tip analiz yeterli değildir. Testlerin her biri yanlış pozitif sonuç verebilir. Hepatit tipini ve bu enfeksiyonun vücuda verdiği hasarın derecesini doğru bir şekilde belirlemek için kapsamlı bir çalışma yapılır. Bu durumda karaciğer biyopsisi yapılır ve enzimleri test edilir: ALT, AST, ayrıca alkalin fosfataz ve LDH. Bir bilirubin testi ve protrombin indeks analizi de yapılabilir.

Hastanın durumunun genel bir analizi ile sadece bu tür testler ve laboratuvar çalışmaları, vücutta hepatit varlığını, şeklini ve ciddiyetini belirlemeye yardımcı olacaktır. Onlara dayanarak, doktor daha fazla tedavi belirleyebilir ve hasta için olası bir prognoz yapabilir.

RNA molekülü içeren bir virüstür. Mutasyona uğrama yeteneğinin yüksek olması nedeniyle vücudun bağışıklık tepkisini önleyebilir. Virüsün altı ana genotipi ve birçok alt tipi vardır. Bölgemizde genotip 1, 2 ve 3 ağırlıklı olarak yayılış göstermektedir.

%75-80'inde hastalık kronikleşir ve bu da karaciğer dokusunun bağ dokusu ile yer değiştirdiği bir duruma neden olur. Fibrozis de kansere veya siroza yol açar. Hastalığın ana bulaşma yolu kan yoluyladır. Bir kişi hepatit C testi için uygunsa, iki ana testi olacaktır. Virüse karşı antikorlar belirlenir ve bunların yokluğunda hepatit olmadığı kabul edilir. Kanda hepatit virüsüne karşı antikorların varlığı tespit edilirse, bir PCR analizi yapılır.

RNA, enfeksiyondan 10-12 gün sonra kanda bu yöntemle belirlenir ve virüsün vücutta aktif olarak çoğaldığını gösterir. Bu süre zarfında virüsü başka bir şekilde tespit etmek imkansızdır, çünkü henüz spesifik antikorlar üretmez ve karaciğer hasarı biyokimyasal testler ve biyopsilerde hala görünmezdir.

PCR çalışmalarının çeşitleri

PCR analizinin belirli avantajları vardır:

Böyle bir çalışmada, hayati aktivitesinin ürünleri değil, virüsün tanımı yapılır. Bu durumda patojenin türünü belirlemek mümkündür.
DNA'nın yalnızca belirli bir bölümünün incelenmesi nedeniyle tekniğin özgüllüğü yüksektir, hatalı sonuç alma olasılığı azalır.
Çok yüksek bir duyarlılığı vardır, kandaki minimum virüs miktarı bile belirlenir.

PCR kullanarak hepatit C için kanı test etmenin iki ana yöntemi vardır: kalitatif ve kantitatif PCR analizi. Bir virüsün mevcut olup olmadığını belirlemek için kalitatif bir yöntem kullanılır. Kanlarında hepatit antikorları olan herkes böyle bir analize tabi tutulur. Sonuç yalnızca iki tür olabilir: "bulundu" ve "bulunamadı", son değer norm olarak kabul edilir.

Pozitif bir test sonucu, numunede virüsün RNA parçalarının bulunduğu anlamına gelir ve bu da kişinin hepatit ile enfekte olduğunu gösterir. Negatif bir sonuç durumunda, iki seçenek mümkündür: enfeksiyon yok veya konsantrasyonu bu yöntemle tespit edilemeyecek kadar düşük.

Nicel yöntem, çalışmanın özünde, amaçlarında ve göstergelerinde farklılık gösterir. Hepatitli tüm hastalar böyle bir analizden geçmez. Diğerleri gibi onun da belirli hedefleri var. Virüsün RNA'sı üzerinde viral yükün belirlenmesi veya kantitatif PCR analizi kullanılır:

kandaki virüsün RNA'sını belirlemek ve "viral hepatit" tanısı koymak;
hepatitin kronikliğini ve hastalığın seyrini tahmin etmek;
antiviral tedaviyi izlemek ve tedavi taktiklerinin genişletilmesi, azaltılması veya değiştirilmesi hakkında kararlar almak.

Çalışma, bu tür göstergelerin varlığında gerçekleştirilir:

kalitatif bir çalışma sırasında hepatit C tespit edildi ve kanda antikorlar bulundu;
karışık hepatit ile;
antiviral tedavi planlanıyorsa;
hepatit C tedavisi sırasında ve sonrasında;
kronik ve akut hepatit C varlığında.

Test, 1 cm³ veya 1 ml'lik bir kan örneğinin belirli bir hacmindeki virüs birimlerinin sayısını değerlendirmek için yapılır. Sonuçlar rakamlarla verilmiştir. Kullanılan göstergeler şunlardır: IU / ml, yani mililitrede uluslararası birim ve ml başına kopya, örneğin 1 ml'sindeki RNA kopya sayısı. Analizin nicel göstergesi ne kadar yüksek olursa, virüsü başka bir kişiye bulaştırma olasılığı o kadar yüksek olur.

R-DNA - dallı DNA yöntemi. Daha kolay ve daha ucuz bir yöntem. Daha fazla sayıda numune için kullanılır, 500 IU / ml'den düşük bir duyarlılığa sahiptir. Bu hassasiyet ile virüsün kanda bulunsa dahi tespit edilmeme ihtimali vardır.

TMA - transkripsiyonel amplifikasyon yöntemi. Bu teknik, kandaki nükleik asitleri tespit eder. 5-10 IU / ml arasında düşük maliyetli ve aynı zamanda yüksek hassasiyete sahiptir. Test sürecini hızlandırmanıza ve maliyetini düşürmenize izin veren nispeten yeni bir teknik.

Laboratuvar tarafından sunulan virüs RNA'sının belirlenmesinin kantitatif analizinin sonuçları aşağıdaki gibi deşifre edilir:

Virüs miktarının sayısal değeri, IU / ml	Sonuçların deşifre edilmesi
Algılanmadı	için norm sağlıklı insanlar. Virüsün değeri, yöntemin duyarlılık sınırının altında veya tamamen yok.
1.8*10^2'ye kadar	Konsantrasyon lineer aralığın altındadır.
8*10^5'e kadar	Virüs kanda bulundu. Viral yük düşüktür.
8*10^5 üzeri
2.4*10^7 üzeri	Virus bulundu. Viremi yüksek, lineer aralığın üzerinde.

Kantitatif analiz sonuçları hem IU / ml birimlerinde hem de ml başına kopyalarda sunulabilir. Aynı zamanda, dönüştürme faktörü genellikle farklı laboratuvarlar ve yöntemler için farklılık gösterir. Değerleri bir ila beş arasında değişir, genellikle ortalama olarak 1 IU'nun ml başına 4 kopya olduğu kabul edilir.

Çeşitli aşamalarda viremi testinin uygulanabilirliği

Test, vücuttaki aktif enfeksiyonu tespit etmek için kullanılır. Sonucuna göre, virüsün bulaşma olasılığının ne olduğu yargılanabilir. Bu önemlidir, örneğin hamilelik sırasında, Konuşuyoruz bir çocuğun hepatitli bir anneden enfeksiyon olasılığı hakkında.

Analiz, yalnızca kandaki virüse karşı antikorların varlığını tespit ettikten sonra gerçekleştirilir. Akut bir hepatit formuna sahip kişilerin %25'e kadarı kendi kendine iyileştiği ve laboratuvar testlerinde virüs bulunmadığı için gereklidir. Sonuçlar, tedavinin etkinliğini ve öncesinde değerlendirmek için kullanılır.

PCR teşhisi, daha sonra etkinliğini belirlemek için tedaviden önce gerçekleştirilir. Olumlu bir tedavi sonucunun olasılığı bu parametre ile ters orantılıdır. Ne kadar yüksekse, prognoz o kadar kötü olur.

Tedavi sırasında analiz 1, 4, 12, 24 haftalarda gerçekleştirilir. Viral yükün böyle bir analizle belirlenmemesi koşuluyla, tedavi tam bir virolojik yanıt üretir.

Tedavinin başlamasından 12 hafta sonra, gösterge iki logaritmik birim azalmazsa, büyük olasılıkla bu terapi bu özel durumda yardımcı olmayacaktır.

Analizlerde logaritmik birim başına viral yükteki düşüş, sonuçtaki sıfır sayısında bir azalma olarak ifade edilir. Örneğin, 1.000.000 IU'dan 100.000 IU'ya düşmelidir.

Tedaviden sonra nüksleri tespit etmeye karar verilir. Dolayısıyla bu parametrenin normdan sapması, vücuttaki virüs miktarının arttığını ve dolayısıyla hastalığın geri döndüğünü gösterir.

Bazı göstergeler sonucu etkileyebilir. Her şeyden önce, bu laboratuvarın olası bir hatası, araştırma yapma kurallarının ihlali, numune saklama ve hazırlama standartları ve ayrıca:

biyomateryal numunenin kontaminasyonu;
kanda artık heparin izlerinin varlığı;
inhibitörlerin kandaki varlığı - PCR bileşenlerini etkileyen kimyasal bileşikler veya proteinler olan maddeler.

Çalışmanın sonuçları, farklı reaktiflerin kullanımı ve diğer nedenlerden dolayı farklı laboratuvarlar için de farklılık gösterebilir. Bu fenomen kesinlikle normaldir. Bu nedenle, tedavinin etkinliğini doğru bir şekilde değerlendirmek için aynı laboratuvarda analiz etmeye değer.

Araştırma metodolojisi hakkında önemli notlar:

Viral yükün seviyesi, karaciğer hasarının derecesini veya hepatitin seyrinin ciddiyetini yargılamak için kullanılamaz. Bu göstergeleri değerlendirmek için biyokimyasal kan testi, biyopsi, elastometri ve diğerleri gibi ek çalışmalar yapmak gerekir.
Viremi göstergesinin yanı sıra antiviral tedavi planlanırken virüsün genotipinin belirlenmesi de önemlidir.