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Le virus de l'hépatite à ARN qualitatif n'a pas été détecté. Diagnostic de l'hépatite C par étude PCR

L'hépatite C est une inflammation des cellules du foie qui survient à la suite d'une infection par le virus du VHC (hépatite C) par contact avec le sang d'une personne infectée. Le code génétique du flavivirus VHC est porté par la molécule d'ARN (acide ribonucléique) contenue dans la structure du virus. Ce phénomène potentiellement mortel se distingue par le secret sur stade initial pathologie. L'intervalle de temps entre l'infection et l'apparition des symptômes (réponse système immunitaire) peut aller d'un mois à six mois. En règle générale, la maladie prend une forme chronique et est difficile à guérir.

La médecine moderne permet de diagnostiquer une pathologie avec des lésions hépatiques mineures. aux plus courantes et méthodes efficaces le diagnostic comprend l'analyse PCR. Considérons dans cet article ce que c'est et quelles sont ses variétés.

Qu'est-ce que la recherche

L'analyse PCR pour l'hépatite C est un test de laboratoire qui détecte le flavirus, le matériel génétique du virus de l'acide ribonucléique (ARN). Il détermine le nombre de molécules d'ARN dans le sang, la qualité du matériel biologique, le type génétique du flavirus VHC.

La méthode PCR pour l'hépatite C permet de détecter la quantité minimale de flavirus avant même la formation d'anticorps, en règle générale peu de temps après l'infection.

L'étude est souvent appelée analyse d'ARN, car elle détecte les particules d'acide ribonucléique d'une taille de 30 à 60 nm contenues dans le flavavirus.

L'étude se déroule comme suit: à jeun, le patient donne du sang d'une veine, qui est ensuite testé par différentes méthodes:

La PCR en temps réel est réalisée de manière fermée et automatisée et a une limite de détection inférieure pour le virus à ARN de 15 UI/mL ;
COBAS AMPLICOR avec une sensibilité de 50-100 UI/ml.

Plus le seuil de sensibilité de la technique de diagnostic est élevé, plus elle est susceptible de détecter la teneur très minimale en virus dans le matériel biologique étudié.

Quels types d'analyse sont utilisés

Une analyse utilisée avec succès depuis plusieurs décennies s'appelle l'hépatite PCR, alors qu'elle est détectée assez simplement et rapidement. En médecine, il existe deux méthodes pour réaliser la réaction, qui sont fondamentalement différentes l'une de l'autre:

une méthode qualitative révèle la présence dans le matériel biologique de la source génétique d'un virus particulier ;
l'analyse quantitative mesure la quantité de matière génétique, permettant de déterminer le stade de la pathologie ou d'évaluer l'efficacité de l'évolution thérapeutique en cours ;
le génotypage détermine le type de virus présent dans l'organisme.

En général, un test sanguin permet d'identifier la nature de la virémie et le type génétique de l'agent pathogène. En règle générale, l'étude est réalisée 1 fois, en fonction du degré de sensibilité du système de diagnostic. Si nécessaire, retester à l'aide d'un réactif ultrasensible.

PCR qualitative

Qu'est-ce qu'un ARN PCR qualitatif pour l'hépatite C ? L'essence de la réaction réside dans la présence de la séquence d'ARN de l'hépatite, et la réaction n'est possible qu'en présence de protéines virales d'une étymologie similaire dans l'ELISA. Au cours du processus de comparaison, la charge et les dommages éventuels à la région du foie sont révélés.

Particularité cette méthode est la capacité de détecter même la présence d'un seul gène.

A noter qu'après les résultats Études PCR et ELISA, le patient a besoin d'un traitement approprié, quel que soit le résultat final de l'ELISA. Un résultat positif indique une infection et un résultat PCR négatif indique un nombre réduit de particules virales par rapport au niveau de sensibilité.

Plusieurs conditions affectent la réception d'un PCR et d'un ELISA négatifs :

manque de conditions appropriées pour la collecte de matériel;
l'analyse résultante contient une contamination ;
en cas d'administration précoce d'injections d'héparine au patient.

Le patient n'est pas tenu de respecter certaines règles de prélèvement sanguin pour l'analyse PCR, dans ce cas, la qualité de cette analyse dépend du personnel médical qui effectue la procédure. La capacité d'établir la présence de la maladie (en particulier dans la forme aiguë) apparaît quelques semaines après l'infection.

Analyse quantitative

Un test quantitatif est recommandé pour détecter la charge virale immédiatement avant la formation d'un traitement ultérieur et la réponse de l'organisme. Le processus de prélèvement sanguin est effectué de la même manière qu'avec une PCR et un ELISA de haute qualité, la seule condition est que le patient n'ait pas la possibilité de fumer avant la procédure.

En ce qui concerne les caractéristiques des données obtenues à la suite de l'étude, l'augmentation de la charge est caractérisée par des indicateurs de 800 000 UI / ml, bas - 400 000 UI / ml. La présence du virus dans le corps du patient est indiquée par PCR pour l'hépatite, un test qualitatif non négatif.

Ce type d'étude permet de déterminer à quel point le patient est dangereux pour les personnes qui l'entourent. Ainsi, par exemple, la détection d'un niveau élevé indique une infectiosité accrue du patient. De plus, les résultats de l'analyse aident à former les plus traitement efficace et pour déterminer l'efficacité de la thérapie disponible.

Une réponse négative rapide au test indique le succès de la technique choisie, et une réponse lente indique la nécessité d'un ajustement et l'utilisation d'un traitement polyvalent.

Le processus de réalisation de la procédure d'analyse dépend du jour spécifique de l'évolution de la maladie. La première détermination est effectuée le premier jour après l'admission du patient à l'hôpital, puis la procédure est répétée à 4, 12 et 24 semaines après le début de la médication.

Ainsi, l'analyse quantitative montre quel traitement est le plus efficace, la durée de la thérapie disponible et le risque du patient par rapport aux autres.

Génotypage

Lors de l'examen du matériel d'analyse, il est important de déterminer l'exactitude du génotype du virus qui a lieu. Actuellement, il existe 11 variétés du virus de l'hépatite C, qui à leur tour comprennent certaines sous-espèces.

Toutes ces espèces réagissent différemment à différentes manières traitement, alors que certaines variétés sont absolument résistantes à de nombreux médicaments.

Le génotype permet de déterminer et de montrer l'état du foie. Il n'est pas rare que les résultats enregistrent "non typé", ce qui signifie que le virus présent dans le sang du patient n'est pas détecté par ce système de test. Cela peut être détecté si un certain génotype ne correspond pas à une zone donnée. Dans une telle situation, l'échantillonnage de l'analyse est à nouveau effectué, tandis qu'un système plus sensible est utilisé pour étudier le matériau.

Méthode ultrasensible

Une méthode ultrasensible est nécessaire dans certains cas lorsque le diagnostic d'hépatite ne peut être effectué par d'autres méthodes, alors que le moment de passer le test est déterminé par le médecin traitant :

si la présence du virus de l'hépatite C est suspectée chez des patients présentant un type latent de la maladie ;
la présence d'anticorps contre le virus de l'hépatite C, non confirmés par un diagnostic PCR ;
afin de déterminer la qualité de l'efficacité de la méthode de traitement choisie et de confirmer le fait d'éliminer la maladie.

La sensibilité de cette méthode est beaucoup plus élevée que celles qui sont habituellement utilisées, cependant, cette méthode n'exclut pas les faux résultats, qu'ils soient positifs ou négatifs. Dans une telle situation, il est important de contrôler la qualité de la procédure et la possibilité de contamination du matériel lui-même.

Décryptage de l'analyse PCR

Le décodage de l'analyse est effectué sur la base des matériaux présentés, tandis que les résultats des études de laboratoire incluent certaines données décrites ci-dessus.

Le déchiffrement peut inclure l'identification d'une réaction en chaîne par polymérase PCR positive dans le test et valeur négative ELISA signifie que le patient n'a aucun signe d'hépatite C dans le sang, mais dans le passé, il a été porté forme pointue de cette maladie. En règle générale, lors du diagnostic, les spécialistes ont recours aux indicateurs des tests PCR.

En résumant tout ce qui précède, nous pouvons conclure que lors de la réalisation d'une analyse, il est important de suivre toutes les règles et recommandations afin que les résultats obtenus soient aussi précis que possible, et sur la base des données obtenues, il est possible de déterminer l'efficacité de la thérapie utilisée et les chances supplémentaires d'un rétablissement complet.

Tout le monde ne sait pas pourquoi ils utilisent la méthode de diagnostic PCR pour l'hépatite C. L'un des groupes de maladies les plus répandus est celui des maladies infectieuses du tractus gastro-intestinal. Le plus souvent, l'estomac (ulcères), les intestins (colite, entérite) et le foie (hépatite) en souffrent.

Parmi tous les organes ci-dessus, le foie porte le plus lourd fardeau. Le rôle du foie dans le corps est extrêmement important :

Presque toutes les réactions métaboliques ont lieu dans le foie (c'est ici que se forment tous les types de composants vitaux qui permettent au corps de fonctionner pleinement).
Le foie est le principal organe détoxifiant. Avec son aide (en particulier par la bile), de nombreux substrats sont éliminés, ce qui peut provoquer une intoxication et entraîner de graves conséquences.

Malheureusement, beaucoup de gens ne prennent pas soin de leur santé, c'est pourquoi le foie commence à souffrir. Une hépatite d'étiologie diverse (virale, toxique) se développe habituellement.

Définition de l'hépatite

occupent une place importante parmi les maladies du foie. La gravité de l'évolution de la maladie, la complexité du traitement les placent au premier rang parmi les pathologies de nature différente de cet organe.

Toutes les hépatites sont divisées en aiguës et chroniques. Les hépatites A et B sont qualifiées d'aiguës, l'hépatite C occupe la première place parmi les chroniques.

Cette maladie est causée par le virus de l'hépatite C. caractéristique c'est que la maladie pendant longtemps peuvent survenir sans aucune manifestation clinique.

Elle se transmet principalement par le sang. Avec la circulation sanguine, le virus est transporté jusqu'au foie, où il commence à se multiplier dans ses cellules. À la suite de l'accumulation de virions, l'hépatocyte infecté est détruit. En réponse à cela, des anticorps commencent à être produits, qui commencent à attaquer les restes d'hépatocytes. De ce fait, au fil du temps, un pool contre les cellules hépatiques s'accumule, ce qui aggrave l'évolution de la maladie.

Du fait que la maladie est asymptomatique ou asymptomatique et que les signes cliniques n'apparaissent qu'avec des dommages cellulaires importants, cette maladie nécessite le développement de méthodes de diagnostic pour détecter sa présence et prendre les mesures appropriées.

Diagnostic de l'hépatite C : tests qualitatifs et quantitatifs

Actuellement, des méthodes telles que la biopsie du foie, l'immunogramme sont utilisées.

Ils permettent de déterminer directement la présence d'hépatocytes atteints (examen d'une biopsie hépatique) ou d'anticorps spécifiques dirigés contre les cellules atteintes (immunogramme). Cependant, il existe une méthode qui vous permet de déterminer de manière fiable la présence du virus lui-même. C'est la PCR - réaction en chaîne par polymérase.

L'essence de cette méthode réside dans le fait que dans certaines conditions, des chaînes d'ARN sont produites. Cela est dû au fait qu'il y a des fragments d'une particule virale dans le sang ou la biopsie étudiée. Lorsqu'ils sont associés à certaines molécules de l'environnement, il se produit la synthèse de chaînes complémentaires à l'ARN viral. Lorsqu'ils sont ensuite analysés et comparés à la séquence nucléotidique connue du virus de l'hépatite C, il est possible de déterminer si ce virus est présent dans l'organisme et si des lésions hépatiques sont présentes.

La PCR est réalisée après la détection d'anticorps spécifiques contre le virus de l'hépatite dans le sang. Après le test, un résultat est délivré - ARN "détecté" ou "non détecté". Parfois, il peut indiquer «pas assez de matériel» - dans ce cas, une deuxième analyse pour l'hépatite C est nécessaire.

Si le nombre de particules virales est inférieur au nombre minimum requis, alors on peut dire qu'il n'y a pas d'hépatite, et les quantités minimales de matériel génétique pourraient être « confuses » en raison du mimétisme du matériel génétique ou de certaines séquences de nucléotides qui pourraient coïncider accidentellement avec celle du virus.

Avec PCR résultat négatif peuvent être observés lorsqu'il y a effectivement des particules virales dans le sang, mais elles sont si peu nombreuses (infection survenue récemment ou analyse précédée d'un traitement antiviral long et intensif) que le système de test ne peut normalement pas déterminer leur concentration. ARN - "non trouvé".
Si la PCR a un résultat positif, il y a tellement de particules virales dans le sang que leur nombre dépasse le seuil de sensibilité inférieur du système de test. Dans ce cas, le risque de développer un processus infectieux est élevé (ou il est déjà présent à un stade assez avancé). Habituellement, une quantité élevée de virus est déjà une indication de traitement et de transplantation hépatique ultérieure.

Parfois, le test peut devenir faux positif ou faux négatif.

Faux résultat négatif PCR de l'hépatite observé lorsque certains composants sont présents dans le milieu réactionnel qui inhibent la formation de copies de la particule virale. De ce fait, il n'est pas possible d'obtenir une image fidèle de l'état du sang, qui contribue au passage du virus et à la progression de la maladie. La présence d'héparine dans le sang peut également affecter la réaction (due à une diminution de la viscosité relative du sang). Une interprétation erronée de l'analyse est également possible lorsque les conditions de transport et de stockage du matériel d'essai ne sont pas remplies.

Des résultats faussement positifs lorsque l'hépatite C est diagnostiquée, la PCR donne le plus souvent lorsque le tube à essai ou l'environnement de travail est contaminé. De plus, des résultats positifs peuvent être observés en présence de virus de l'hépatite d'autres groupes (en raison d'une réaction croisée).

Analyse PCR qualitative pour la détection de l'hépatite C

Présence dans le sang un grand nombre les cryoglobulines affectent également directement la conduite de la PCR. De ce fait, avant d'effectuer C, il est impératif de déterminer leur concentration dans le sang afin d'identifier à l'avance la distorsion du résultat et de la prévenir.

Après avoir effectué ces tests, il devient clair s'il y a des particules virales dans le sang. Lors de leur détermination, il est recommandé de commencer immédiatement un traitement antiviral afin de ralentir la progression du processus. Contrairement à l'hépatite B, il n'y a pas de guérison complète de l'hépatite C; la maladie ne passe qu'à un stade latent et commence à évoluer plus lentement. Les dommages au foie sont inévitables. À la dernière étape du processus, lorsque le foie ne peut plus faire face à sa fonction, il peut être nécessaire de le transplanter.

Le traitement est effectué principalement avec deux médicaments - l'interféron et la ribavirine.

Leur efficacité à ralentir le processus de dégradation des hépatocytes a été prouvée. En cours de route, une thérapie par perfusion est nécessairement prescrite pour faciliter le travail du foie.

Tous les patients qui ont connu une augmentation du nombre de particules virales dans le sang doivent être enregistrés auprès d'un hépatologue. Plusieurs fois par an, il leur est recommandé de subir un examen préventif afin de déterminer la progression du processus et d'identifier en temps opportun les indications de transplantation. De plus, les hépatoprotecteurs peuvent également être utilisés, bien que les avis des médecins diffèrent quelque peu. Certains pensent que ces médicaments permettent d'arrêter le processus et de protéger les hépatocytes qui n'ont pas encore été touchés ; d'autres sont convaincus qu'il est inutile de les prendre et qu'un traitement antiviral intensif doit être mis en place.

Ainsi, l'hépatite C appartient à la catégorie des maladies dont l'identification est quelque peu difficile. L'amélioration des méthodes de diagnostic, ainsi que des examens préventifs opportuns réduiront l'incidence de cette maladie. La prévention de cette maladie est également importante. Il faut soigneusement éviter tout contact avec le sang, refuser de prendre des médicaments, alors seulement cette maladie sera éradiquée. L'essentiel dans la prévention et le traitement est l'attitude consciente du patient vis-à-vis de sa santé.

Dans l'hépatite C, le test d'ARN est la méthode la plus importante et la plus précise pour déterminer la durée de l'évolution de la maladie. Cette étude vous permet de déterminer la méthode de traitement nécessaire. Plusieurs tests sanguins sont couramment utilisés pour diagnostiquer la maladie :

marqueurs de l'hépatite C - utilisés dès la première suspicion de la présence de la maladie;
Etude de l'ARN du virus de l'hépatite C.

Hépatite virale

L'hépatite virale C est une maladie infectieuse qui affecte le foie. La principale voie d'infection est l'ingestion de sang infecté. Cela peut se produire lors d'une transfusion sanguine en raison d'instruments médicaux non stériles. Parfois, la maladie est transmise par des rapports sexuels non protégés ou lors de l'accouchement d'une mère infectée à son enfant.

La maladie est dangereuse pour sa forme chronique. Elle peut durer toute une vie et provoquer un dysfonctionnement hépatique grave, une cirrhose ou un cancer. Environ 80% des personnes infectées ont une forme chronique de la maladie.

Le principal danger de la maladie réside dans la forme latente de la maladie, sans symptômes évidents. Parfois, la température augmente, des nausées et des vomissements surviennent, la faiblesse physique, la fatigue augmentent, l'appétit et le poids sont perdus. Le tissu hépatique de cette maladie se caractérise par une légère compaction, à la suite de laquelle ses cellules dégénèrent de manière maligne. Le développement de la maladie est très lent et peut prendre plusieurs décennies.

Définition de l'ARN

Qu'est-ce que l'ARN de l'hépatite C et pourquoi devrait-il être testé ? Tout virus est la plus petite particule d'ARN. La détermination de l'ARN du virus est essentiellement une étude biologique des cellules sanguines afin de déterminer la présence dans l'organisme du matériel génétique du virus de l'hépatite C. Pour cela, la méthode de réaction en chaîne par polymérase est utilisée. Il existe 2 types de tests pour déterminer l'ARN du virus de l'hépatite C.

Un test qualitatif détermine la présence d'un virus dans les cellules système circulatoire. Un test positif indique que le virus se multiplie activement dans le sang, infectant les cellules hépatiques saines. La thérapie antivirale consiste à réussir ce test pendant la période de 4, 12 et 24 semaines de traitement. Après l'arrêt du traitement, l'analyse se fait également après 24 semaines, puis 1 fois par an.

Un test quantitatif est effectué pour déterminer la concentration (teneur spécifique) du virus de l'hépatite C dans le sang. C'est-à-dire que la quantité d'ARN viral dans une certaine quantité de sang est déterminée. La gravité de la maladie ne dépend pas de la quantité de virus. Cette analyse est effectuée pour déterminer le degré infectieux de la maladie. Il détermine le succès du traitement et la durée de la thérapie antivirale, et est effectué avant son début, et 3 mois après la fin.

A ce jour, 10 sont connus. Le génotypage de l'ARN viral permet de diagnostiquer la présence de différents types maladies. Le type génétique du virus est décisif pour fixer le moment du traitement. Un traitement correctement sélectionné peut donner une garantie de 90% de récupération complète.

Le virus de l'hépatite C (VHC) est un virus à ARN de la famille des Flaviviridae. Cette infection est capable de se multiplier dans les cellules sanguines (monocytes, neutrophiles, lymphocytes B et macrophages), ainsi que d'infecter les cellules du foie lui-même - les hépatocytes. Grâce à haut degré activité mutationnelle, ce type d'hépatite est capable d'éviter les effets du système immunitaire humain.

Il existe 11 génotypes et de nombreux sous-types d'un tel virus, qui diffèrent par le degré d'atteinte hépatique et affectent le moment du traitement de l'hépatite. Cette diversité de l'hépatite C nécessite différentes méthodes de traitement antiviral. Par exemple, les génotypes de l'hépatite 1 et 4 doivent être traités pendant 48 semaines, et pour un traitement contre les virus des 2e et 3e types, cela peut ne prendre que 24 semaines.

Après qu'un test rapide pour l'hépatite C a donné un résultat positif, une analyse PCR est effectuée pour détecter l'ARN de ce virus dans des échantillons de sang.

Diagnostic PCR

La réaction en chaîne par polymérase (PCR) est une technique expérimentale de détection des virus. Une telle analyse de l'hépatite C vous permet d'augmenter considérablement la concentration de certains fragments d'ADN ou d'ARN du virus dans les échantillons soumis. Cela permet de les reconnaître et même d'en compter le nombre.

Ce test pour l'hépatite C est réalisé selon la méthode suivante :

Un échantillon de sang (matériel génétique), qui peut contenir le gène de l'hépatite souhaité, est introduit dans un tube à essai. Des substances spéciales y sont placées - des amorces, ce sont des segments de courte longueur du gène souhaité, qui sont synthétisés chimiquement. De l'ADN ou de l'ARN polymérase est également ajoutée à ce vaisseau, elle est capable de construire des chaînes d'acides nucléiques complètement identiques à l'original. A la composition résultante est ajoutée une sélection de nucléotides libres, qui sont un Matériau de construction pour l'ADN et l'ARN, et l'un d'eux contient les plus petites particules de phosphore radioactif.
Le mélange résultant est d'abord chauffé à 95 degrés, à la suite de quoi les deux brins d'ADN, entrelacés à l'état normal, se déroulent en raison d'un tel impact.
Pour continuer l'analyse, la préparation est refroidie, à ce moment les amorces sont attachées à la section désirée du génome du virus de l'hépatite, empêchant l'ADN de se former en double hélice. Lorsque le mélange refroidit, la polymérase recherche exactement des chaînes uniques de nucléotides. Lors de la fixation de cette enzyme, elle glisse le long de la chaîne d'ADN (comme un bloc sur une corde), et sur une double hélice elle n'est pas capable de "travailler", pour cela le mélange est chauffé.
Pour prolonger l'analyse, un réchauffage est effectué, ce qui conduit à nouveau à la séparation des chaînes nucléotidiques. Lors de l'exécution de tels cycles de PCR dans l'échantillon, le nombre de gènes d'hépatite souhaités augmente dans des proportions géométriques, et le reste du matériel génétique est produit (formé) uniquement selon un schéma linéaire.
Pour compléter l'étude, la solution est purifiée des particules résiduelles de nucléotides. Ils sont séparés par électrophorèse, avec la séparation selon les paramètres du poids moléculaire des chaînes d'ADN. De tels tests de détection de l'hépatite C par PCR permettent de déterminer si les gènes viraux souhaités sont présents ou non dans l'échantillon à tester.

L'avantage de ce test est le seuil de sensibilité très élevé de la réaction PCR. Idéalement, une telle technique de diagnostic ne nécessite qu'un seul génome viral pour l'ensemble de l'échantillon.

De plus, une telle PCR est tout à fait spécifique. Chacun des gènes a une séquence unique de nucléotides qui, comme une empreinte digitale, ne peut être répétée nulle part. Pour ce test de l'hépatite C, les amorces sont synthétisées de telle manière qu'elles correspondent absolument aux régions uniques des gènes d'intérêt qu'aucune autre séquence n'a.

Cette technique vous permet également d'analyser l'hépatite B C et de les déterminer, aidant à établir le diagnostic final.

Tel analyse de laboratoire vous permet d'obtenir plus d'informations que la simple présence ou l'absence d'ARN du virus de l'hépatite C ou d'un autre type dans les échantillons de sang. En déterminant le paramètre du rayonnement radioactif, il est également possible de déterminer la quantité de matériel génétique souhaité qui se trouvait à l'origine dans l'échantillon à l'étude. Cela vous permet de déterminer le paramètre de la soi-disant charge virale - la concentration de particules d'ARN de l'hépatite dans un certain volume.

Analyse PCR qualitative

Cette analyse vous permet de déterminer la présence du virus de l'hépatite dans des échantillons de sang. Il doit être effectué pour toutes les personnes chez qui on a découvert des anticorps contre l'hépatite.

À la suite d'une telle étude, il ne peut y avoir que deux valeurs:

"Découvert". Un tel résultat de test positif est interprété comme suit: des fragments d'ARN du virus de l'hépatite ont été trouvés dans l'échantillon analysé à partir de matériel biologique. Il en résulte qu'il y avait un fait d'infection du patient par ce virus. Cela peut indiquer que l'agent causal de l'hépatite se multiplie dans le corps et infecte de nouvelles cellules, détruisant le foie.
"Non-détecté". Ce résultat indique qu'aucun fragment d'ARN spécifique du virus de l'hépatite C n'a été trouvé dans l'échantillon qui a été analysé dans ce laboratoire. Il est également possible que la concentration de l'ARN du virus causal dans l'échantillon de test était si faible que le test pourrait pas le détecter. Dans de tels cas, le niveau de concentration est dit inférieur au seuil de sensibilité du dosage.

Un tel test peut également être faux positif ou faux négatif, en raison d'une contamination du biomatériau ou de la présence dans les échantillons de substances spécifiques qui réagissent avec les composants chimiques nécessaires à l'analyse.

Il convient de souligner que dans les phases aiguës de l'hépatite C, une étude qualitative utilisant la méthode PCR peut détecter son ARN déjà 1 à 2 semaines après le moment de l'infection du corps. Cela signifie qu'il est possible de détecter la maladie bien avant la manifestation de ses symptômes externes ou l'apparition d'anticorps contre l'hépatite dans le corps.

Le prélèvement sanguin (à partir d'une veine) est effectué de préférence à jeun.

Analyse PCR quantitative

A l'aide de cette analyse, le niveau de concentration du virus de l'hépatite chez un patient (charge virale) est déterminé. Un tel test doit être réussi afin d'évaluer la quantité d'ARN viral dans une unité d'un certain volume.

Les tests de décryptage de l'hépatite C, effectués selon cette méthode, peuvent avoir les résultats suivants:

L'analyse PCR quantitative réalisée à différentes périodes de traitement antiviral (1ère, 4ème, 12ème et 24ème semaines) permet de juger de l'efficacité du traitement et d'apporter les ajustements nécessaires.

Spécificités de l'analyse

Ce test doit être effectué pour déterminer les différents génotypes de l'hépatite C. Actuellement, 11 génotypes de cet agent pathogène et de nombreux sous-types sont connus. Dans notre pays, les génotypes de l'hépatite C des 1er, 2e et 3e types sont courants. En laboratoire, différents sous-types de ces espèces peuvent être détectés : 1a, 1c, 2a, 2c ou 3, 4, 5, 6 génotypes avec diverses modifications de sous-types. Pour toutes ces hépatites, la spécificité du dosage est de 100 %.

La clarification de la modification du génotype permet de sélectionner le traitement approprié. La présence de certains types de génotypes chez un patient n'indique pas que la maladie est plus facile ou plus difficile, ce ne sont que des variétés du virus de l'hépatite, et pas plus.

Dans les cas où le laboratoire ne peut pas isoler le génotype du virus, le résultat peut être délivré : « Non typé. Les génotypes ont été étudiés : tel et tel » (par exemple, 1a, 2c, 3av). Cette transcription indique que dans ce laboratoire, il n'y avait pas de réactifs appropriés qui pourraient déterminer le génotype du virus de l'hépatite. Au cours de l'étude, une vérification a été faite pour les virus figurant dans la liste, mais leur correspondance avec des échantillons d'ARN n'a pas été identifiée.

Pour poser un diagnostic définitif, un seul type d'analyse ne suffit pas. Chacun des tests peut donner un résultat faussement positif. Pour déterminer avec précision le type d'hépatite et le degré de dommages corporels causés par cette infection, une étude approfondie est réalisée. Dans ce cas, une biopsie du foie est pratiquée et ses enzymes sont testées : ALT, AST, ainsi que la phosphatase alcaline et la LDH. Un test de bilirubine et une analyse de l'indice de prothrombine peuvent également être effectués.

Seul un ensemble de tels tests et études de laboratoire, avec analyse générale l'état du patient aidera à déterminer la présence d'hépatite dans le corps, sa forme, ainsi que sa gravité. Sur cette base, le médecin peut déterminer un traitement ultérieur et établir un pronostic possible pour le patient.

C'est un virus qui contient une molécule d'ARN. Il est capable d'éviter la réponse immunitaire du corps en raison de sa grande capacité à muter. Il existe six principaux génotypes du virus et de nombreux sous-types. Dans notre région, les génotypes 1, 2 et 3 sont majoritairement distribués.

Dans 75 à 80%, la maladie devient chronique, ce qui provoque une condition dans laquelle le tissu hépatique est remplacé par du tissu conjonctif. La fibrose, à son tour, conduit au cancer ou à la cirrhose. La principale voie de transmission de la maladie est le sang. Si une personne est admissible à un test de dépistage de l'hépatite C, elle subira deux tests principaux. Les anticorps contre le virus sont déterminés et, en leur absence, on considère qu'il n'a pas d'hépatite. Si la présence d'anticorps contre le virus de l'hépatite est détectée dans le sang, une analyse PCR est effectuée.

L'ARN est déterminé par cette méthode dans le sang dès 10 à 12 jours après l'infection et indique que le virus se multiplie activement dans le corps. Pendant cette période, il est tout simplement impossible de détecter le virus d'une autre manière, car il ne produit pas encore d'anticorps spécifiques et les dommages au foie sont encore invisibles dans les tests biochimiques et les biopsies.

Variétés d'études PCR

L'analyse PCR présente certains avantages :

Dans une telle étude, la définition du virus lui-même est effectuée, et non les produits de son activité vitale. Dans ce cas, il est possible de déterminer le type d'agent pathogène.
La technique a une grande spécificité du fait que seule une certaine section d'ADN est examinée, la probabilité d'obtenir des résultats erronés est réduite.
Il a une sensibilité très élevée, même la quantité minimale de virus dans le sang est déterminée.

Il existe deux méthodes principales pour tester le sang pour l'hépatite C à l'aide de la PCR : l'analyse PCR qualitative et quantitative. Une méthode qualitative est utilisée pour déterminer si un virus est présent. Tous ceux qui ont des anticorps contre l'hépatite dans leur sang subissent une telle analyse. Le résultat ne peut être que de deux types : "trouvé" et "non trouvé", dernière valeur considérée comme la norme.

Un résultat de test positif signifie que des fragments d'ARN du virus ont été trouvés dans l'échantillon, ce qui, à son tour, indique que la personne était infectée par l'hépatite. En cas de résultat négatif, deux options sont possibles : il n'y a pas eu d'infection ou sa concentration est si faible qu'elle n'est pas détectée par cette méthode.

La méthode quantitative diffère dans l'essence de l'étude, dans ses objectifs et ses indications. Tous les patients atteints d'hépatite ne subissent pas une telle analyse. Lui, comme tout autre, a certains objectifs. La détermination de la charge virale ou analyse quantitative par PCR sur l'ARN du virus est utilisée :

déterminer l'ARN du virus dans le sang et poser un diagnostic d'"hépatite virale" ;
prédire la chronicité de l'hépatite et l'évolution de la maladie;
pour surveiller le traitement antiviral et prendre des décisions concernant son extension, sa réduction ou un changement de tactique de traitement.

L'étude est réalisée en présence de telles indications:

l'hépatite C a été détectée lors d'une étude qualitative et des anticorps ont été trouvés dans le sang ;
avec une hépatite mixte;
si un traitement antiviral est prévu ;
pendant et après le traitement de l'hépatite C;
en présence d'hépatite C chronique et aiguë.

Le test est réalisé pour évaluer le nombre d'unités virales dans un volume donné d'un échantillon de sang de 1 cm³ ou 1 ml. Les résultats sont donnés en chiffres. Les indicateurs utilisés sont : UI/ml, qui signifie unité internationale par millilitre et copies par ml, le nombre de copies d'ARN dans 1 ml d'échantillon. Plus l'indicateur quantitatif de l'analyse est élevé, plus la probabilité de transmettre le virus à une autre personne est grande.

R-ADN - méthode de l'ADN ramifié. Une méthode plus simple et moins coûteuse. Utilisé pour un plus grand nombre d'échantillons, a une faible sensibilité, à partir de 500 UI/ml. Avec cette sensibilité, il y a une chance que le virus ne soit pas détecté, même s'il est présent dans le sang.

TMA - méthode d'amplification transcriptionnelle. Cette technique détecte les acides nucléiques dans le sang. Il a un faible coût et en même temps une sensibilité élevée, de 5 à 10 UI / ml. Une technique relativement nouvelle qui vous permet d'accélérer et de réduire le coût du processus de test.

Les résultats de l'analyse quantitative du dosage de l'ARN viral, présentés par le laboratoire, se décryptent comme suit :

Valeur numérique de la quantité de virus, UI/ml	Déchiffrer les résultats
Non-détecté	Norme pour personnes en bonne santé. La valeur du virus est inférieure à la limite de sensibilité de la méthode ou elle est totalement absente.
Jusqu'à 1,8*10^2	La concentration est inférieure à la plage linéaire.
Jusqu'à 8*10^5	Le virus a été trouvé dans le sang. La charge virale est faible.
Plus de 8*10^5
Plus de 2,4 * 10 ^ 7	Virus détecté. La virémie est élevée, au-dessus de la plage linéaire.

Les résultats d'analyse quantitative peuvent être soumis à la fois en unités d'UI / ml et en copies par ml. Dans le même temps, le facteur de conversion diffère généralement selon les laboratoires et les méthodes. Ses valeurs vont de un à cinq, il est généralement admis qu'en moyenne 1 UI correspond à 4 copies par ml.

Applicabilité des tests de virémie à différentes étapes

Le test est utilisé pour détecter une infection active dans le corps. Selon son résultat, on peut juger quelle est la probabilité de transmission du virus. Ceci est important, par exemple, pendant la grossesse, quand nous parlons sur la possibilité d'infection d'un enfant d'une mère atteinte d'hépatite.

L'analyse n'est effectuée qu'après avoir détecté la présence d'anticorps contre le virus dans le sang. C'est nécessaire parce que jusqu'à 25% des personnes qui ont eu une forme aiguë d'hépatite se rétablissent d'elles-mêmes et qu'elles n'ont pas le virus lors des tests de laboratoire. Les résultats sont utilisés pour évaluer l'efficacité du traitement et avant celui-ci.

Le diagnostic PCR est réalisé avant le traitement afin de déterminer ultérieurement son efficacité. La probabilité d'une issue favorable du traitement est inversement proportionnelle à ce paramètre. Plus il est élevé, plus le pronostic est mauvais.

Pendant le traitement, l'analyse est effectuée à 1, 4, 12, 24 semaines. Le traitement produit une réponse virologique complète, à condition que la charge virale ne soit pas déterminée par une telle analyse.

Si 12 semaines après le début du traitement, l'indicateur ne diminue pas de deux unités logarithmiques, il est fort probable que ce traitement n'aidera pas dans ce cas particulier.

Dans les analyses, une baisse de la charge virale par unité logarithmique se traduit par une diminution de un du nombre de zéros dans le résultat. Par exemple, à partir de 1 000 000 UI, il devrait diminuer à 100 000 UI.

Après le traitement est déterminé à détecter les rechutes. Ainsi, l'écart de ce paramètre par rapport à la norme indique que la quantité de virus dans le corps augmente et, par conséquent, la maladie revient.

Certains indicateurs peuvent affecter le résultat. Tout d'abord, il s'agit d'une erreur possible du laboratoire, de violations des règles de conduite de la recherche, des normes de conservation et de préparation des échantillons, ainsi que de:

contamination de l'échantillon de biomatériau ;
la présence de traces résiduelles d'héparine dans le sang ;
la présence dans le sang d'inhibiteurs - des substances qui sont des composés chimiques ou des protéines qui affectent les composants de la PCR.

Les résultats de l'étude peuvent également différer d'un laboratoire à l'autre, ce qui est dû à l'utilisation de différents réactifs et à d'autres raisons. Ce phénomène est tout à fait normal. Par conséquent, pour évaluer correctement l'efficacité du traitement, il convient d'analyser dans le même laboratoire.

Remarques importantes sur la méthodologie de recherche :

Le niveau de charge virale ne peut pas être utilisé pour juger du degré d'atteinte hépatique ou de la gravité de l'évolution de l'hépatite elle-même. Pour évaluer ces indicateurs, il est nécessaire de mener des études supplémentaires, telles qu'un test sanguin biochimique, une biopsie, une élastométrie et autres.
Lors de la planification et de la thérapie antivirale, en plus de l'indicateur de virémie, il est important de déterminer le génotype du virus.