Kvalitatív RNS-sel rendelkező hepatitis vírust nem mutattak ki. A hepatitis C diagnózisa PCR-vizsgálattal

A hepatitis C a májsejtek gyulladása, amely a HCV vírussal (hepatitisz C) való fertőzés következtében alakul ki, a fertőzött személy vérével való érintkezés következtében. A HCV flavivírus genetikai kódját a vírus szerkezetében található RNS (ribonukleinsav) molekula hordozza. Ezt az életveszélyes jelenséget a titoktartás jellemzi kezdeti szakaszban patológia. A fertőzés és a tünetek megjelenése közötti időintervallum (válasz immunrendszer) egy hónaptól hat hónapig terjedhet. Általában a betegség krónikus formát ölt, és nehezen gyógyítható.

A modern orvostudomány lehetővé teszi a patológia diagnosztizálását kisebb májkárosodással. a leggyakoribb és hatékony módszerek A diagnózis magában foglalja a PCR elemzést. Nézzük meg ebben a cikkben, hogy mi ez és milyen fajtái léteznek.

Mi a kutatás

A hepatitis C PCR-analízise egy olyan laboratóriumi vizsgálat, amely kimutatja a flavírust, a ribonukleinsav vírus (RNS) genetikai anyagát. Meghatározza a vérben lévő RNS-molekulák számát, a biológiai anyag minőségét, a HCV flavírus genetikai típusát.

A hepatitis C PCR-módszere lehetővé teszi a flavírus minimális mennyiségének kimutatását még az antitestek képződése előtt, általában röviddel a fertőzés után.

A vizsgálatot gyakran RNS-analízisnek is nevezik, mivel a flavavírusban található 30-60 nm méretű ribonukleinsav részecskéket detektálja.

A vizsgálatot a következőképpen végezzük: a beteg éhgyomorra vért ad egy vénából, amelyet azután különféle módszerekkel tesztelnek:

• A valós idejű PCR zárt, automatizált módon történik, és az RNS-vírus kimutatási határa 15 NE/ml;
• COBAS AMPLICOR 50-100 NE/ml érzékenységgel.

Minél magasabb a diagnosztikai technika érzékenységi küszöbe, annál valószínűbb, hogy a vizsgált biológiai anyagban a vírus minimális mennyiségét mutatják ki.

Milyen típusú elemzéseket használnak

A több évtizede sikeresen alkalmazott elemzést PCR hepatitisnek nevezik, miközben nagyon egyszerűen és gyorsan kimutatható. Az orvostudományban két módszer létezik a reakció végrehajtására, amelyek alapvetően különböznek egymástól:

• egy kvalitatív módszer felfedi egy adott vírus genetikai forrásának jelenlétét a biológiai anyagban;
• a kvantitatív elemzés méri a genetikai anyag mennyiségét, lehetővé téve a patológia stádiumának meghatározását vagy a folyamatban lévő terápiás kurzus hatékonyságának értékelését;
• A genotipizálás meghatározza a szervezetben jelenlévő vírus típusát.

Általában a vérvizsgálat segít azonosítani a virémia természetét és a kórokozó genetikai típusát. A vizsgálatot általában 1 alkalommal végzik el, a diagnosztikai rendszer érzékenységének mértékétől függően. Szükség esetén ismételje meg a tesztet ultraérzékeny reagenssel.

Kvalitatív PCR

Mi a kvalitatív PCR RNS a hepatitis C esetében? A reakció lényege a hepatitis RNS szekvencia jelenlétében rejlik, és a reakció csak hasonló etimológiájú vírusfehérjék jelenlétében lehetséges az ELISA-ban. Az összehasonlítás során kiderül a májterület terhelése és esetleges károsodása.

Megkülönböztető tulajdonság ez a módszer az a képesség, hogy akár egyetlen gén jelenlétét is kimutatják.

Meg kell jegyezni, hogy az eredmények után PCR vizsgálatokés ELISA, a beteg megfelelő kezelést igényel, függetlenül attól, hogy mi lett az ELISA végső eredménye. A pozitív fertőzést, a PCR negatív pedig az érzékenységi szinthez képest csökkent vírusrészecskék számát jelzi.

Számos körülmény befolyásolja a negatív PCR és ELISA eredményét:

• az anyaggyűjtés megfelelő feltételeinek hiánya;
• az eredményül kapott elemzés szennyeződést tartalmaz;
• a betegnek történő heparin injekció korai beadása esetén.

A páciensnek nem kell betartania bizonyos szabályokat a PCR-elemzés céljából történő vérvételre vonatkozóan, ebben az esetben az elemzés minősége az eljárást végző egészségügyi dolgozótól függ. A betegség jelenlétének megállapítása (különösen az akut formában) a fertőzés után néhány héten belül megjelenik.

Mennyiségi elemzés

Kvantitatív vizsgálat javasolt a vírusterhelés kimutatására közvetlenül a további terápia kialakulása és a szervezet reakciója előtt. A vérvétel folyamata ugyanúgy történik, mint a jó minőségű PCR-rel és ELISA-val, csak az a feltétel, hogy a betegnek ne legyen lehetősége a beavatkozás előtt dohányozni.

Ami a vizsgálat eredményeként kapott adatok jellemzőit illeti, a megnövekedett terhelést 800 000 NE / ml, alacsony - 400 000 NE / ml mutatók jellemzik. A vírus jelenlétét a páciens szervezetében a hepatitis PCR-je jelzi, amely nem negatív kvalitatív teszt.

Ez a fajta vizsgálat lehetővé teszi annak meghatározását, hogy a beteg mennyire veszélyes a körülötte lévő emberekre. Így például a magas szint észlelése a beteg fokozott fertőzőképességét jelzi. Ezen túlmenően az elemzés eredményei segítenek a továbbképzésben leginkább hatékony kezelésés annak meghatározása, hogy az elérhető terápia mennyire hatékony.

A gyors negatív tesztválasz a választott technika sikerességét, a lassú pedig a kiigazítás szükségességét és a sokoldalú kezelés alkalmazását jelzi.

Az elemzés elvégzésének folyamata a betegség lefolyásának adott napjától függ. Az első meghatározás a beteg kórházi felvételét követő első napon történik, majd a gyógyszeres kezelés megkezdése után 4, 12 és 24 héttel megismételjük az eljárást.

Így a kvantitatív elemzés megmutatja, melyik kezelés a leghatékonyabb, az elérhető terápia időtartama és a beteg kockázata más emberekhez képest.

Genotipizálás

Az elemzési anyag vizsgálata során fontos meghatározni a bekövetkező vírus genotípus pontosságát. Jelenleg a hepatitis C vírusnak 11 fajtája létezik, amelyek bizonyos alfajokat tartalmaznak.

Ezek a fajok mindegyike eltérően reagál különböző módokon kezelés, míg egyes fajták abszolút ellenállóak sok gyógyszerrel szemben.

A genotípus lehetővé teszi a máj állapotának meghatározását és kimutatását. Nem ritka, hogy az eredményeket „nincs típusozva” rögzítik, ami azt jelenti, hogy ez a tesztrendszer nem észleli a vírust a páciens vérében. Ezt akkor lehet kimutatni, ha egy adott genotípus nem felel meg egy adott zónának. Ilyen helyzetben ismét megtörténik az elemzés mintavételezése, miközben egy érzékenyebb rendszert használnak az anyag tanulmányozására.

Ultraszenzitív módszer

Ultraszenzitív módszerre van szükség bizonyos esetekben, amikor a hepatitis diagnózisa más módszerekkel nem végezhető el, míg a vizsgálat időpontját a kezelőorvos határozza meg:

• ha gyanús a hepatitis C vírus jelenléte a betegség látens típusában szenvedő betegeknél;
• a hepatitis C vírus elleni antitestek jelenléte, amelyet PCR-diagnosztika nem igazolt;
• a választott kezelési módszer hatékonyságának minőségének megállapítása és a betegség megszüntetésének ténye megerősítése érdekében.

Ennek a módszernek az érzékenysége jóval magasabb, mint a szokásosan használtaké, azonban ez a módszer nem zárja ki a hamis, pozitív és negatív eredményeket sem. Ilyen helyzetben fontos ellenőrizni az eljárás minőségét és magának az anyagnak a szennyeződésének lehetőségét.

A PCR elemzés megfejtése

Az elemzés dekódolása a bemutatott anyagok alapján történik, míg a laboratóriumi vizsgálatok eredményei tartalmaznak bizonyos fent leírt adatokat.

A megfejtés magában foglalhatja a pozitív PCR polimeráz láncreakció azonosítását a vizsgálatban és negatív érték Az ELISA azt jelenti, hogy a beteg vérében nincs hepatitis C jele, de korábban hordozták éles forma ennek a betegségnek. A diagnózis során a szakemberek általában a PCR-vizsgálatok mutatóit használják.

A fentieket összefoglalva megállapíthatjuk, hogy az elemzés során minden szabályt és ajánlást be kell tartani, hogy a kapott eredmények minél pontosabbak legyenek, és a kapott adatok alapján meg lehessen határozni a hatékonyságot. az alkalmazott terápia és a teljes gyógyulás további esélye.

Nem mindenki tudja, miért használják a PCR diagnosztikai módszert a hepatitis C-re. A betegségek egyik elterjedt csoportja a gyomor-bél traktus fertőző betegségei. Leggyakrabban a gyomor (fekély), a belek (colitis, enteritis) és a máj (hepatitisz) szenved.

A fenti szervek közül a máj viseli a legnagyobb terhet. A máj szerepe a szervezetben rendkívül fontos:

1. Szinte minden anyagcsere-reakció a májban megy végbe (itt képződik minden létfontosságú komponens, amely lehetővé teszi a szervezet teljes működését).
2. A máj a fő méregtelenítő szerv. Segítségével (különösen az epén keresztül) sok szubsztrátot távolítanak el, amelyek mérgezést okozhatnak, és súlyos következményekkel járhatnak.

Sajnos sokan nem vigyáznak az egészségükre, ezért a máj szenvedni kezd. Általában különböző etiológiájú (vírusos, toxikus) hepatitis alakul ki.

A hepatitis meghatározása

fontos helyet foglalnak el a májbetegségek között. A betegség lefolyásának súlyossága, a kezelés összetettsége miatt az első helyre kerültek a szerv eltérő természetű patológiái között.

Minden hepatitis akut és krónikus. A hepatitis A és B az akut kategóriába sorolható, a hepatitis C pedig az első helyen áll a krónikusak között.

Ezt a betegséget a hepatitis C vírus okozza. jellemző tulajdonság az a betegség hosszú ideje klinikai megnyilvánulások nélkül is előfordulhat.

Főleg a vér útján terjed. A vérárammal a vírus a májba kerül, ahol elkezd szaporodni sejtjeiben. A virionok felhalmozódása következtében a fertőzött hepatocita elpusztul. Erre válaszul antitestek képződnek, amelyek megtámadják a hepatociták maradványait. Emiatt idővel a májsejtek ellen halmozódik fel, ami súlyosbítja a betegség lefolyását.

Tekintettel arra, hogy a betegség tünetmentes vagy tünetmentes, és a klinikai tünetek csak jelentős sejtkárosodással jelentkeznek, ez a betegség diagnosztikai módszerek kidolgozását igényli a jelenlétének kimutatására és a megfelelő intézkedések megtételére.

A hepatitis C diagnózisa: kvalitatív és kvantitatív tesztek

Jelenleg olyan módszereket használnak, mint a májbiopszia, az immunogram.

Lehetővé teszik az érintett hepatociták jelenlétének közvetlen meghatározását (májbiopszia vizsgálata) vagy az érintett sejtek elleni specifikus antitestek jelenlétét (immunogram). Van azonban egy módszer, amely lehetővé teszi magának a vírusnak a jelenlétének megbízható meghatározását. Ez a PCR-polimeráz láncreakció.

Ennek a módszernek a lényege abban rejlik, hogy bizonyos körülmények között RNS-láncok keletkeznek. Ez annak a ténynek köszönhető, hogy a vérben vagy a vizsgált biopsziában egy vírusrészecske töredékei vannak. Amikor a környezetben egyes molekulákkal kombinálódnak, a vírus RNS-sel komplementer láncok szintézise megy végbe. Ha ezt követően elemezzük és összehasonlítjuk a hepatitis C vírus ismert nukleotidszekvenciájával, megállapítható, hogy ez a vírus jelen van-e a szervezetben, és hogy van-e májkárosodás.

A PCR-t a hepatitis vírus elleni specifikus antitestek vérben történő kimutatása után végezzük. A teszt után eredmény jelenik meg - RNS „detektálva” vagy „nem észlelve”. Alkalmanként előfordulhat, hogy „nincs elég anyag” – ebben az esetben egy második hepatitis C elemzésre van szükség.

Ha a vírusrészecskék száma kevesebb, mint az előírt minimális szám, akkor azt mondhatjuk, hogy nincs hepatitis, és a genetikai anyag minimális mennyiségei „összetévedhetnek” a genetikai anyag mimikája vagy egyes nukleotidszekvenciák miatt. véletlenül egybeesik a víruséval.

1. PCR-rel negatív eredmény akkor figyelhető meg, ha valóban vannak vírusrészecskék a vérben, de olyan kevés (a fertőzés nemrég történt, vagy az elemzést hosszú és intenzív vírusellenes terápia előzte meg), hogy a tesztrendszer egyszerűen nem tudta normálisan meghatározni a koncentrációjukat. RNS - "nem található".
2. Ha a PCR pozitív eredménye, akkor annyi vírusrészecske van a vérben, hogy számuk meghaladja a tesztrendszer alsó érzékenységi küszöbét. Ebben az esetben nagy a kockázata a fertőző folyamat kialakulásának (vagy már meglehetősen előrehaladott stádiumban van). Általában a nagy mennyiségű vírus már a kezelés és az azt követő májátültetés indikációja.

Néha a teszt álpozitív vagy álnegatív lehet.

Hamis negatív eredmény Hepatitis PCR akkor figyelhető meg, ha bizonyos komponensek vannak jelen a reakcióközegben, amelyek gátolják a vírusrészecske másolatainak képződését. Emiatt nem lehet valós képet kapni a vér állapotáról, amely hozzájárul a vírus átjutásához és a betegség progressziójához. A heparin jelenléte a vérben szintén befolyásolhatja a reakciót (a vér relatív viszkozitásának csökkenése miatt). Az elemzés helytelen értelmezése akkor is lehetséges, ha a vizsgálati anyag szállításának és tárolásának feltételei nem teljesültek.

A hepatitis C diagnosztizálása esetén álpozitív eredményeket ad a PCR leggyakrabban, ha a kémcső vagy a munkakörnyezet szennyezett. Ezenkívül pozitív eredmények figyelhetők meg más csoportok hepatitis vírusainak jelenlétében (a keresztreakció miatt).

Kvalitatív PCR elemzés a hepatitis C kimutatására

Jelenlét a vérben egy nagy szám a krioglobulinok közvetlenül befolyásolják a PCR lefolytatását is. Emiatt a C végrehajtása előtt feltétlenül meg kell határozni koncentrációjukat a vérben, hogy előzetesen azonosítsák az eredmény torzulását és megelőzzék azt.

E vizsgálatok elvégzése után világossá válik, hogy vannak-e vírusrészecskék a vérben. Meghatározásukkor ajánlatos azonnal elkezdeni a vírusellenes terápiát, hogy lelassítsák a folyamat előrehaladását. A hepatitis B-vel ellentétben a hepatitis C-re nincs teljes gyógymód; a betegség csak látens stádiumba megy át, és lassabban kezd elhaladni. A májkárosodás elkerülhetetlen. A folyamat utolsó szakaszában, amikor a máj már nem képes megbirkózni a funkciójával, átültetésre lehet szükség.

A kezelést főleg két gyógyszerrel végzik - interferonnal és ribavirinnel.

Hatékonyságuk a hepatocita károsodás folyamatának lassításában bizonyított. Útközben szükségszerűen infúziós terápiát írnak elő a máj munkájának megkönnyítése érdekében.

Minden olyan beteget, akinél megnövekedett a vírusrészecskék száma a vérben, regisztráltatni kell egy hepatológussal. Évente többször ajánlott megelőző vizsgálatot végezni a folyamat előrehaladásának meghatározása és a transzplantáció indikációinak időben történő azonosítása érdekében. Ezenkívül hepatoprotektorok is használhatók, bár az orvosok véleménye némileg eltér. Egyesek úgy vélik, hogy ezek a gyógyszerek lehetővé teszik a folyamat leállítását és a még nem érintett hepatociták védelmét; mások meg vannak győződve arról, hogy nincs értelme szedni őket, és intenzív vírusellenes kezelést kell végezni.

Így a hepatitis C a betegségek kategóriájába tartozik, amelyek azonosítása kissé nehézkes. A diagnosztikai módszerek javítása, valamint az időben történő megelőző vizsgálatok csökkentik a betegség előfordulását. Ennek a betegségnek a megelőzése is fontos. Óvatosan kerülni kell a vérrel való érintkezést, megtagadni a gyógyszerek szedését, csak akkor ez a betegség megszűnik. A megelőzésben és a kezelésben a legfontosabb a beteg egészségéhez való tudatos hozzáállása.

Hepatitis C esetén az RNS-vizsgálat a legfontosabb és legpontosabb módszer a betegség lefolyásának meghatározására. Ez a tanulmány lehetővé teszi a szükséges kezelési módszer meghatározását. A betegség diagnosztizálására általában számos vérvizsgálatot alkalmaznak:

• hepatitis C markerek - a betegség jelenlétének első gyanúja esetén használják;
• A hepatitis C vírus RNS-vizsgálata.

Vírusos hepatitisz

A vírusos hepatitis C egy fertőző betegség, amely a májat érinti. A fertőzés fő módja a fertőzött vér lenyelése. Ez történhet vérátömlesztés során a nem steril orvosi műszerek miatt. Néha a betegséget nem védett közösülés vagy szülés során továbbítják a fertőzött anyától a gyermekéhez.

A betegség krónikus formája miatt veszélyes. Egy életen át tarthat, és súlyos májműködési zavarokat, cirrózist vagy rákot okozhat. A fertőzöttek körülbelül 80%-a a betegség krónikus formája.

A betegség fő veszélye a betegség látens formájában rejlik, nyilvánvaló tünetek nélkül. Néha a hőmérséklet emelkedik, hányinger és hányás jelentkezik, fizikai gyengeség, fáradtság növekszik, étvágy és súly csökken. Ebben a betegségben a májszövetet enyhe tömörödés jellemzi, aminek következtében sejtjei rosszindulatúan degenerálódnak. A betegség kialakulása nagyon lassú, több évtizedet is igénybe vehet.

RNS definíció

Mi az a hepatitis C RNS, és miért kell tesztelni? Bármely vírus az RNS legkisebb részecskéje. A vírus RNS-ének meghatározása lényegében vérsejtek biológiai vizsgálata a hepatitis C vírus genetikai anyagának szervezetben való jelenlétének meghatározása céljából, ehhez a polimeráz láncreakciós módszert alkalmazzák. A hepatitis C vírus RNS-ének meghatározására kétféle teszt létezik.

A kvalitatív teszt meghatározza a vírus jelenlétét a sejtekben keringési rendszer. A pozitív teszt azt jelzi, hogy a vírus aktívan szaporodik a vérben, megfertőzve az egészséges májsejteket. A vírusellenes terápia során a 4, 12 és 24 hetes kezelés során át kell menni ezen a teszten. A kezelés leállítása után az elemzést 24 hét elteltével is elvégezzük, majd évente 1 alkalommal.

Kvantitatív vizsgálatot végeznek a hepatitis C vírus koncentrációjának (fajlagos tartalmának) meghatározására a vérben. Vagyis meghatározzák a vírus RNS mennyiségét egy bizonyos mennyiségű vérben. A betegség súlyossága nem függ a vírus mennyiségétől. Ezt az elemzést a betegség fertőzöttségének meghatározására végzik. Meghatározza a kezelés sikerét és az antivirális terápia időtartamát, és annak megkezdése előtt, illetve 3 hónappal a vége után kerül végrehajtásra.

A mai napig 10 ismert. A vírus RNS genotipizálása lehetővé teszi a vírus jelenlétének diagnosztizálását különböző típusok betegségek. A vírus genetikai típusa döntő a terápia időzítésének meghatározásában. A megfelelően kiválasztott kezelés 90%-os garanciát adhat a teljes gyógyulásra.

A hepatitis C vírus (HCV) a Flaviviridae családba tartozó RNS vírus. Ez a fertőzés képes szaporodni a vérsejtekben (monocitákban, neutrofilekben, B-limfocitákban és makrofágokban), valamint megfertőzi magát a máj sejtjeit - hepatocitákat. Köszönet magas fokozat mutációs aktivitás, ez a típusú hepatitis képes elkerülni az emberi immunrendszer hatásait.

Az ilyen vírusnak 11 genotípusa és nagyon sok altípusa létezik, amelyek különböznek a májkárosodás mértékében, és befolyásolják a hepatitis kezelésének időpontját. A hepatitis C ilyen sokfélesége különböző vírusellenes terápiás módszereket igényel. Például a hepatitis 1 és 4 genotípusát 48 hétig kell kezelni, a 2. és 3. típusú vírusok elleni terápia esetén pedig csak 24 hétig tarthat.

Miután a hepatitis C gyorstesztje pozitív eredményt adott, PCR-elemzést végzünk a vírus RNS-ének kimutatására a vérmintákban.

PCR diagnosztika

A polimeráz láncreakció (PCR) egy kísérleti technika a vírusok kimutatására. A hepatitis C ilyen elemzése lehetővé teszi, hogy jelentősen növelje a vírus bizonyos DNS- vagy RNS-fragmenseinek koncentrációját a benyújtott mintákban. Ez lehetővé teszi, hogy felismerjék őket, és még meg is számolják a számukat.

Ezt a hepatitis C-teszt a következő módszerrel történik:

1. Vérmintát (genetikai anyagot), amely tartalmazhatja a kívánt hepatitis gént, egy kémcsőbe vezetik. Speciális anyagokat helyeznek rá - primereket, ezek a kívánt gén rövid hosszúságú szegmensei, amelyeket kémiai úton szintetizálnak. Ebbe az edénybe DNS vagy RNS polimeráz is kerül, amely képes az eredetivel teljesen azonos nukleinsavláncokat építeni. A kapott készítményhez adunk egy válogatott szabad nukleotidot, amelyek különleges építési anyag DNS-re és RNS-re, és az egyik a legkisebb radioaktív foszfor részecskéket tartalmazza.
2. A kapott elegyet először 95 fokra melegítjük, aminek eredményeként a normál állapotban összefonódó DNS mindkét szála ilyen becsapódás következtében feloldódik.
3. Az elemzés folytatásához a készítményt lehűtjük, ekkor a primerek a hepatitis vírus genomjának kívánt szakaszához kapcsolódnak, megakadályozva, hogy a DNS kettős hélixgé alakuljon. Amikor a keverék lehűl, a polimeráz pontosan egyetlen nukleotidláncot keres. Ez az enzim a kötődés során végigcsúszik a DNS-láncon (mint egy blokk a kötélen), kettős hélixen pedig nem tud „dolgozni”, ehhez a keveréket felmelegítik.
4. Az elemzés kiterjesztése érdekében újramelegítést végzünk, ami ismét a nukleotidláncok szétválásához vezet. A mintában ilyen PCR-ciklusok végzése során geometriai arányban növekszik a kívánt hepatitis gének száma, a többi genetikai anyag csak lineáris mintázatban termelődik (képződik).
5. A vizsgálat befejezéséhez az oldatot megtisztítják a maradék nukleotidrészecskéktől. Elválasztásuk elektroforézissel történik, a szétválasztás a DNS-láncok molekulatömegének paraméterei szerint történik. Az ilyen, PCR-t alkalmazó hepatitis C-tesztek lehetővé teszik annak meghatározását, hogy a kívánt vírusgének jelen vannak-e a vizsgált mintában vagy sem.

Ennek a tesztnek az előnye a PCR reakció nagyon magas érzékenységi küszöbe. Ideális esetben egy ilyen diagnosztikai technika csak egy vírusgenomot igényel a teljes mintához.

Ezenkívül az ilyen PCR teljesen specifikus. Mindegyik génnek egyedi nukleotidszekvenciája van, amely az ujjlenyomathoz hasonlóan sehol sem ismétlődhet meg. Ehhez a hepatitis C vizsgálathoz a primereket úgy szintetizálják, hogy azok teljesen megegyezzenek a kérdéses gének olyan egyedi régióival, amelyekkel egyetlen másik szekvencia sem rendelkezik.

Ez a technika lehetővé teszi a hepatitis B C elemzését és meghatározását is, segítve a végső diagnózis felállítását.

Ilyen laboratóriumi elemzés lehetővé teszi, hogy több információhoz jusson, mint a hepatitis C vírus RNS vagy más típusú vérminták jelenlétéről vagy hiányáról. A radioaktív sugárzás paraméterének meghatározásával az is megállapítható, hogy a kívánt genetikai anyagból eredetileg mennyi volt a vizsgált mintában. Ez lehetővé teszi az úgynevezett vírusterhelés paraméterének meghatározását - a hepatitis RNS-részecskék koncentrációját egy bizonyos térfogatban.

Kvalitatív PCR elemzés

Ez az elemzés lehetővé teszi a hepatitis vírus jelenlétének meghatározását a vérmintákban. Minden olyan személynél el kell végezni, akinél kimutatták a hepatitis elleni antitesteket.

Egy ilyen vizsgálat eredményeként csak két érték lehet:

• "Felfedezve". Az ilyen pozitív teszteredményt a következőképpen értelmezzük: az elemzett biológiai anyagból származó mintában hepatitis vírus RNS fragmentumait találták. Ebből az következik, hogy a páciens megfertőződött ezzel a vírussal. Ez arra utalhat, hogy a hepatitis kórokozója elszaporodik a szervezetben, és új sejteket fertőz meg, tönkretéve a májat.
• "Nem található". Ez az eredmény arra utal, hogy a laboratóriumban vizsgált mintában nem találtak hepatitis C vírusra specifikus RNS-fragmentumot.Az is lehetséges, hogy a kórokozó vírus RNS-ének koncentrációja a vizsgálati mintában olyan alacsony volt, hogy a teszt alkalmas volt. nem észleli. Ilyen esetekben a koncentrációszintről azt mondják, hogy a vizsgálat érzékenységi küszöbe alatt van.

Az ilyen teszt álpozitív vagy álnegatív is lehet, a bioanyag szennyeződése vagy a mintákban olyan meghatározott anyagok jelenléte miatt, amelyek reakcióba lépnek az elemzéshez szükséges kémiai összetevőkkel.

Hangsúlyozni kell, hogy a hepatitis C akut fázisaiban a PCR módszerrel végzett kvalitatív vizsgálat már a szervezet fertőzésének pillanatától számított 1-2 hét elteltével kimutathatja RNS-ét. Ez azt jelenti, hogy a betegséget jóval a külső tünetek megjelenése vagy a hepatitis elleni antitestek megjelenése előtt lehet kimutatni.

A vérvétel (vénából) lehetőleg éhgyomorra történik.

Kvantitatív PCR elemzés

Ennek az elemzésnek a segítségével meghatározzák a hepatitis vírus koncentrációjának szintjét egy betegben (vírusterhelés). Egy ilyen teszten át kell menni annak érdekében, hogy meg lehessen határozni a vírus RNS mennyiségét egy bizonyos térfogategységben.

Az ezzel a módszerrel végzett hepatitis C megfejtési tesztek a következő eredményeket adhatják:

Az antivirális terápia különböző időszakaiban (1., 4., 12. és 24. hét) végzett kvantitatív PCR elemzés lehetővé teszi a kezelés hatékonyságának megítélését és a szükséges módosítások elvégzését.

Az elemzés sajátosságai

Ezt a tesztet el kell végezni a hepatitis C különböző genotípusainak meghatározásához. Jelenleg ennek a kórokozónak 11 genotípusa és számos altípusa ismert. Hazánkban a hepatitis C 1., 2. és 3. típusú genotípusa gyakori. Laboratóriumokban e fajok különféle altípusai mutathatók ki: 1a, 1c, 2a, 2c, vagy 3, 4, 5, 6 genotípus különböző altípusmódosításokkal. Mindezen hepatitisek esetében a meghatározás specifitása 100%.

A genotípus módosulásának tisztázása lehetővé teszi a megfelelő kezelés kiválasztását. Bizonyos típusú genotípusok jelenléte a betegben nem azt jelzi, hogy a betegség könnyebb vagy nehezebb, ezek csak a hepatitis vírus fajtái, és nem több.

Azokban az esetekben, amikor a laboratórium nem tudja elkülöníteni a vírus genotípusát, a következő eredményt lehet kiadni: „Nincs típusozva. Vizsgálták a genotípusokat: ilyen és olyan” (például 1a, 2c, 3av). Ez az átirat azt jelzi, hogy ebben a laboratóriumban nem voltak megfelelő reagensek, amelyek meghatározhatták volna a hepatitis vírus genotípusát. A vizsgálat során ellenőrizték a listán szereplő vírusokat, de az RNS mintákkal való megfelelésüket nem azonosították.

A végleges diagnózis felállításához csak egyfajta elemzés nem elegendő. Mindegyik teszt hamis pozitív eredményt adhat. A hepatitis típusának és a fertőzés által okozott károsodás mértékének pontos meghatározásához átfogó vizsgálatot végeznek. Ebben az esetben májbiopsziát készítenek, és megvizsgálják az enzimeket: ALT, AST, valamint alkalikus foszfatáz és LDH. Bilirubin teszt és protrombin index elemzés is elvégezhető.

Csak egy sor ilyen vizsgálatot és laboratóriumi vizsgálatot végeznek általános elemzés a beteg állapota segít meghatározni a hepatitis jelenlétét a szervezetben, annak formáját és súlyosságát. Ezek alapján az orvos meghatározhatja a további kezelést, és lehetséges prognózist készíthet a beteg számára.

Ez egy vírus, amely RNS-molekulát tartalmaz. Magas mutációs képességének köszönhetően képes elkerülni a szervezet immunválaszát. A vírusnak hat fő genotípusa és számos altípusa van. Térségünkben elsősorban az 1-es, 2-es és 3-as genotípusok vannak elterjedve.

75-80%-ban a betegség krónikussá válik, ami olyan állapotot okoz, amelyben a májszövetet kötőszövet váltja fel. A fibrózis viszont rákhoz vagy cirrózishoz vezet. A betegség fő átviteli útja a véren keresztül történik. Ha egy személy jogosult hepatitis C-tesztre, két fő tesztet kell elvégeznie. Meghatározzák a vírus elleni antitesteket, és ezek hiányában úgy tekintik, hogy nincs hepatitis. Ha a vérben kimutatják a hepatitis vírus elleni antitestek jelenlétét, PCR-elemzést végeznek.

Az RNS-t ezzel a módszerrel határozzák meg a vérben már a fertőzés után 10-12 nappal, és azt jelzi, hogy a vírus aktívan szaporodik a szervezetben. Ebben az időszakban egyszerűen lehetetlen más módon kimutatni a vírust, mivel még nem termel specifikus antitesteket, és a májkárosodás továbbra is láthatatlan a biokémiai vizsgálatokban és biopsziákban.

A PCR-vizsgálatok változatai

A PCR elemzésnek vannak bizonyos előnyei:

1. Egy ilyen vizsgálat során magát a vírust határozzák meg, nem pedig létfontosságú tevékenységének termékeit. Ebben az esetben meg lehet határozni a kórokozó típusát.
2. A technika nagy specifitással rendelkezik, mivel a DNS-nek csak egy bizonyos szakaszát vizsgálják, így csökken a hibás eredmények megszerzésének valószínűsége.
3. Nagyon nagy érzékenységgel rendelkezik, még a vérben lévő vírus minimális mennyiségét is meghatározzák.

Két fő módszer létezik a hepatitis C vérvizsgálatára PCR segítségével: kvalitatív és kvantitatív PCR-elemzés. Kvalitatív módszert alkalmaznak annak meghatározására, hogy van-e vírus. Mindazok, akiknek vérében hepatitis elleni antitestek vannak, ilyen elemzésen vesznek részt. Az eredmény csak kétféle lehet: "talált" és "nem található", utolsó érték normának tekintették.

A pozitív teszteredmény azt jelenti, hogy a vírus RNS-fragmenseit találták a mintában, ami viszont azt jelzi, hogy a személy hepatitisszel fertőzött volt. Negatív eredmény esetén két lehetőség van: nem volt fertőzés, vagy olyan alacsony a koncentrációja, hogy ezzel a módszerrel nem lehet kimutatni.

A kvantitatív módszer a vizsgálat lényegében, céljaiban és indikációiban tér el. Nem minden hepatitisben szenvedő beteg esik át ilyen elemzésen. Neki, mint bárki másnak, vannak bizonyos céljai. A vírusterhelés meghatározását vagy a PCR kvantitatív elemzését a vírus RNS-én használják:

• a vírus RNS-ének meghatározása a vérben és a "vírusos hepatitis" diagnózisa;
• a hepatitis krónikusságának és a betegség lefolyásának előrejelzése;
• a vírusellenes kezelés nyomon követésére és annak kiterjesztésére, csökkentésére vagy a kezelési taktika megváltoztatására vonatkozó döntések meghozatalára.

A vizsgálatot az alábbi jelzések jelenlétében végzik:

• a hepatitis C-t egy kvalitatív vizsgálat során mutatták ki, és antitesteket találtak a vérben;
• vegyes hepatitis esetén;
• ha vírusellenes terápiát terveznek;
• a hepatitis C kezelés alatt és után;
• krónikus és akut hepatitis C jelenlétében.

A tesztet az 1 cm³ vagy 1 ml-es vérminta adott térfogatában lévő vírusegységek számának értékelésére végzik. Az eredményeket számokban adjuk meg. A használt indikátorok a következők: IU / ml, ami a milliliterenkénti nemzetközi egységet és a kópia per ml-t jelenti, az RNS másolatok száma a minta 1 ml-ében. Minél magasabb az elemzés mennyiségi mutatója, annál nagyobb a valószínűsége annak, hogy a vírust átadják egy másik személynek.

R-DNS - elágazó DNS módszer. Könnyebb és olcsóbb módszer. Nagyobb számú mintához használják, alacsony érzékenységű, 500 NE / ml-től. Ennél az érzékenységnél fennáll annak az esélye, hogy a vírust még akkor sem észlelik, ha az a vérben van.

TMA - transzkripciós amplifikációs módszer. Ez a technika kimutatja a nukleinsavakat a vérben. Alacsony költséggel és ugyanakkor nagy érzékenységgel rendelkezik, 5-10 NE / ml. Egy viszonylag új technika, amely lehetővé teszi a tesztelési folyamat felgyorsítását és költségeinek csökkentését.

A vírus RNS meghatározásának kvantitatív analízisének laboratóriumi eredményeit a következőképpen fejtjük meg:

A vírus mennyiségének számértéke, NE / ml	Az eredmények megfejtése
Nem található	Norm for egészséges emberek. A vírus értéke a módszer érzékenységi határa alatt van, vagy teljesen hiányzik.
Akár 1,8*10^2	A koncentráció a lineáris tartomány alatt van.
Akár 8*10^5	A vírust a vérben találták meg. A vírusterhelés alacsony.
8*10^5 felett
Több mint 2,4*10^7	Vírus észlelve. A virémia magas, a lineáris tartomány felett van.

A kvantitatív elemzési eredmények mind NE / ml egységben, mind másolatban milliliterenként megadhatók. Ugyanakkor a konverziós tényező általában eltérő a különböző laboratóriumokban és módszerekben. Értékei egytől ötig terjednek, általánosan elfogadott, hogy átlagosan 1 NE 4 példány/ml.

A virémia vizsgálat alkalmazhatósága különböző szakaszokban

A tesztet a szervezetben lévő aktív fertőzés kimutatására használják. Eredménye alapján meg lehet ítélni, mekkora a vírus átvitelének valószínűsége. Ez fontos például terhesség alatt, amikor beszélgetünk a hepatitisben szenvedő anyától származó gyermek fertőzésének lehetőségéről.

Az elemzést csak a vírus elleni antitestek vérben történő kimutatása után végezzük. Erre azért van szükség, mert a hepatitis akut formáján átesettek akár 25%-a magától felépül, és a laboratóriumi vizsgálatok alapján nincs bennük a vírus. Az eredményeket a kezelés hatékonyságának értékelésére és azt megelőzően használják fel.

A kezelés előtt PCR-diagnosztikát végeznek, hogy később meghatározzák a hatékonyságát. A kezelés kedvező kimenetelének valószínűsége fordítottan arányos ezzel a paraméterrel. Minél magasabb, annál rosszabb a prognózis.

A kezelés során az elemzést 1, 4, 12, 24 héten végezzük. A kezelés teljes virológiai választ eredményez, feltéve, hogy a vírusterhelést ilyen elemzés nem határozza meg.

Ha 12 héttel a terápia megkezdése után az indikátor nem csökken két logaritmikus egységgel, akkor valószínűleg ez a terápia nem segít ebben az esetben.

Az elemzésekben a vírusterhelés logaritmikus egységenkénti csökkenését az eredmény nullák számának eggyel való csökkenéseként fejezzük ki. Például 1 000 000 NE-ről 100 000 NE-re kell csökkennie.

A kezelés után meghatározzák a relapszusok kimutatását. Tehát ennek a paraméternek a normától való eltérése azt jelzi, hogy a vírus mennyisége nő a szervezetben, és így a betegség visszatér.

Egyes mutatók befolyásolhatják az eredményt. Mindenekelőtt ez a laboratórium lehetséges hibája, a kutatási szabályok megsértése, a minták tárolására és előkészítésére vonatkozó szabványok, valamint:

• a bioanyag-minta szennyeződése;
• a heparin maradék nyomainak jelenléte a vérben;
• inhibitorok jelenléte a vérben - olyan anyagok, amelyek kémiai vegyületek vagy fehérjék, amelyek befolyásolják a PCR összetevőit.

A vizsgálat eredményei a különböző laboratóriumokban is eltérőek lehetnek, ami a különböző reagensek használatából és egyéb okokból adódik. Ez a jelenség teljesen normális. Ezért a kezelés hatékonyságának helyes értékeléséhez érdemes ugyanabban a laboratóriumban elemezni.

Fontos megjegyzések a kutatási módszertannal kapcsolatban:

• A vírusterhelés mértéke alapján nem lehet megítélni a májkárosodás mértékét vagy magának a hepatitisnek a lefolyásának súlyosságát. Ezen mutatók értékeléséhez további vizsgálatokat kell végezni, például biokémiai vérvizsgálatot, biopsziát, elasztometriát és másokat.
• A vírusellenes terápia tervezésénél a virémia indikátora mellett fontos a vírus genotípusának meghatározása is.